Développement d'un nouveau type de vecteur rétroviral autodéletant pour l'étude de l'intégration rétrovirale et le transfert de gènes

par Caroline Torne-Celer

Thèse de doctorat en Sciences

Sous la direction de Gérard Verdier.

Soutenue en 2000

à Lyon 1 .

Le président du jury était Gérard Verdier.


  • Résumé

    Un systeme de transfert de genes est constitue de 2 composantes : un vecteur et une lignee transcomplementante qui permet sa production sous forme de particules retrovirales. Ce travail a eu pour principal objectif d'ameliorer la composante vecteur d'un systeme retroviral. Le vecteur etudie possede une sequence d'integration surnumeraire (sequence att) en position interne, entre 2 genes de selection (neo sous controle de la ltr et puro sous controle d'un promoteur interne). L'analyse de clones d'infection a mis en evidence un mecanisme d'integration atypique pour 31% des provirus (clivage imprecis des extremites virales, duplications de taille incorrecte et frequentes deletions d'adn genomique au cours de l'integration), qui pourrait resulter du clivage de la sequence att interne par l'integrase, bien que l'existence d'un precurseur att-ltr issu de la transcription inverse ne puisse etre exclue (1). D'autres provirus integres selon le mecanisme classique, par le biais des ltr, presentent des duplications de taille incorrecte qui pourraient s'expliquer par un mauvais positionnement de l'in du a des homologies de sequences entre adn viral et adn cellulaire (2). Le vecteur att presente des proprietes autodeletantes qui permettent de reduire le risque de mobilisation du vecteur en cas de surinfection. L'efficacite de ce processus d'autodeletion peut etre amelioree en augmentant la pression de selection sur le gene puro (75% des provirus sont bornes par la sequence att interne et la ltr3' et plus de 92% sont non mobilisables). La production du vecteur est augmentee d'un facteur 10 par la deletion du signal de polyadenylation du gene puro ou bien le retournement de la cassette de selection puro. L'efficacite de transduction du gene puro est amelioree par l'augmentation de la taille de la sequence att interne (3). Enfin, nous avons montre que le vecteur att conserve ses proprietes autodeletantes sur cellules humaines (4). Ces resultats presentent un nouveau type de vecteur autodeletant qui pourrait etre utilise pour des applications de transfert de genes ou de therapie genique.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (196 p.)
  • Annexes : Bibliogr. p. 175-196 et notes bibliographiques dans chaque article

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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