Degradation des substrats hydrophobes par la levure yarrowia lipolytica

• Auteur / Autrice : HUIJIE WANG
• Direction : Jean-Marc Nicaud
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées. Sciences médicales
• Date : Soutenance en 2000
• Etablissement(s) : Paris, Institut national d'agronomie de Paris Grignon

Résumé

La levure yarrowia lipolytica est capable d'utiliser les substrats hydrophobes (alcanes, acides gras, triglycerides), comme sources de carbone. Trois familles multigeniques (les cytochromes p450, les acyl-coa oxydases, les lipases) sont impliquees dans la degradation des substrats hydrophobes. Au cours de ce travail, nous avons etudie la famille des acyl-coa oxydases et la famille des lipases. La familles des acyl-coa oxydases (aox) est composee de cinq isoenzymes (aox1 a aox5) codes par les genes pox1 a pox5. La fonction de ces genes a ete analysee par expression dans e. Coli et par l'etude de souches de y. Lipolytica mono- et multi- disruptees pour les genes pox. Nous avons demontre qu'aox3p est specifique des chaines courtes, aox2p est specifique des chaines longues et aox5p ne presente pas de specificite de longueur de chaine. Les aox sont impliquees dans la bioconversion des acides gras en lactones. En effet, le contexte genetique pox modifie les niveaux de bioconversion. L'augmentation de production la plus importante est obtenue dans une souche deletee du gene pox3. L'analyse du transport des aox dans les peroxysomes a ete initiee par l'etude de l'adressage de formes modifiees d'aox2p. Il existe chez y. Lipolytica au moins huit genes codant des lipases. Nous avons identifie le gene lip2 codant la lipase extracellulaire (triacylglycerol hydrolase). Il code une pre-pro-proteine de 334 acides amines. Le precurseur est glycosyle et mature par l'endoprotease codee par le gene xpr6. De nouveaux vecteurs d'amplification ont ete developpes. Avec ces vecteurs, nous avons obtenu des souches amplifiees pour le gene lip2 produisant 1200u/ml, soit 100 fois plus que la souche sauvage.