GABA antagonisti siprofloksazin’in sitotoksisite ve oksidan stres indükleyci etkileri üzerinde çalişsmalar

par Aylin Gürbay

Thèse de doctorat en Spécialité de la santé

Sous la direction de Filiz Hincal et de Alain Favier.

Soutenue en 2000

à l'Ankara, Université Hacettepe en cotutelle avec Grenoble 1 .

  • Titre traduit

    In vitro studies on the cytotoxicity and oxidative stress inducing effects of the GABA antagonist antibiotic ciprofloxacin


  • Résumé

    In this study, in vitro oxidative stress and lipid peroxidation inducing effects of the fluoroquinolone antibiotic, ciprofloxacin (CPR), the adverse effects of which has been attributed to its GABA antagonistic activity was investigated. CPR was found to be cytotoxic at high concentrations and induced significant lipid peroxidation in normal human fibroblast cell cultures, and primary cultures of rat astrocyte cells. Preincubation of both cell cultures with vitamin E provided significant protection against both cytotoxicity and induction of lipid peroxidation. Incubation of rat cerebral or liver microsomes with CPR induced significant level of lipid peroxidation and caused significant loss of cellular thiols, in addition to the production of radicals as shown by ESR-spin trapping with 4-POBN. The ESR analysis revealed a spectrum of a characteristic six-line and signal corresponding to a carbon-centered 4-POBN/lipid-derived radical (aN= 15,44 G, aHb= 2,86 G). The ESR signal intensity was dependent on the concentration of CPR and incubation time; radical generation required the presence of CYP450 activity and NADPH as shown with the incubation caused by SKF 525A and ZnCl2, and seemed to be dependent on iron. Iron chelators such as desferrioxaimine and DTPA, and vitamin E and its hydrosoluble analog Trolox inhibited the radical production while the addition of iron increased the signal intensity. The on-line HPLC-ESI MS analysis of microsomal incubation mixture showed that the mass spactra contained ions consistent with the trapping of the "pentenyl radical" by 4-POBN. Further analysis of the mass spectra suggested that a 4Ø N radical form of the oxo metabolite of CPR might have been produced in the microsomal mixture.


  • Résumé

    Dans cette étude nous présentons les effets toxiques prooxydants d'un antibiotique du groupe des fluoroquinolones, la ciprofloxacine (CPR) dont les effets secondaires etaiént jusqu la attribues a son action antagoniste du GABA. Nous montrons que la CPR est cytotoxique a haute concentrations et induit une peroxydation lipidique pour des fibroblastes humains cutaneus normaux en culture ainsi que pour des astrocytes de rat en culture primaire. La pré-incubation de ces deux culture cellulaires avec de la vitamine E assure a la fois une forte protection contre la mort cellulaire et la peroxydation lipidique. L'incubation de microsomes cérébraux au hépatiques de rat avec la CPR induit une fort niveau de peroxydation lipidique et une diminition de la quantité des groupements thiols en même temps que la production de radicaux libres démontrée par RPE après piégeage par un agent spécifique de spin-trapping la 4-POBN. L'analyse du signal de RPE réléve un spectre caractéristique formé da six pics, correspondant à une radical carbone centré 4-POBN-derivé lipidique (aN= 15,44 G, aHb= 2,86 G). L'intensité du signal RPE se révèle proportionnelle à la dose de CPR et au temps d'incubation, et nécessite le fonctionnement du système CYP450 en présence de NADPH, comme le montre l'incubation induite par SKF 525A et ZnCl2. La formation du radical est de plus dépendante de la présence de Fer car elle est amplifiée par addition de ce métal et inhibée par des agents chélateurs comme la desferrioxamine au l'acide deethylénetriamine pentaacétique, ainsi que par la vitamin E son analogue hydrosoluble, le Trolox. L'analyse directe du mélange réactionnel microsomial en couplage HPLC-ESI MS, montre la présence de fragments compatibles avec le piégeage d'un radical "pentenyl" par la 4-POBN. D'autres signaux de spectrométrie de masse suggèrent la formation dans le milieu réactionnel de 4Ø N du métabolite oxo de la CPR.

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Informations

  • Détails : 2 vol. (216, 38 f.)
  • Annexes : Bibliogr. 360 réf.

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  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin-d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire Médecine Pharmacie.
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  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire de santé (Paris). Pôle pharmacie, biologie et cosmétologie.
  • Non disponible pour le PEB
  • Cote : MFTH 2749
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