Etudes structurales de la phosphoproteine du virus de sendai

par NICOLAS TARBOURIECH

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Rob W.H. Ruigrok.

Soutenue en 2000

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    Ce travail de these a permis d'explorer la structure de la proteine p du virus de sendai. Cette proteine est le cofacteur de la polymerase qui permet sa fixation sur la matrice d'arn recouvert de la proteine n. Elle est donc un element indispensable a la synthese d'arn par le virus. L'analyse de la sequence primaire de cette proteine a permis la definition de domaines structuraux qui a ete renforcee par une etude par proteolyse limitee. Nous avons etudie la forme generale et la contribution de chacun des domaines a cette forme par chromatographie sur tamis moleculaire et diffusion de rayons x ou de neutrons aux petits angles. Celle-ci s'est revelee tres allongee. Ces domaines ont ete etudies plus en details par pontage chimique, ultra-centrifugation analytique et par un test de dilution de his-tag. Ces experiences ont montre que cette proteine forme des tetrameres tres stables. Une etude par cristallographie aux rayons x a alors ete entreprise sur le domaine de multimerisation. Les premiers cristaux obtenus se sont reveles macles par une macle rare qui a ete etudiee et comprise. Une nouvelle construction, legerement plus courte, nous a permis grace a un derive de mercure et a une experience de dispersion anomale multi-longueur d'onde, de resoudre cette structure. Ce domaine adopte une conformation en homo-tetra-helice super enroulee qui n'avais jamais ete decrite dans le cas d'une proteine naturelle. Une etude par resonance magnetique nucleaire a ete initiee afin d'etudier le domaine de fixation a la nucleocapside. Cette etude nous permettra, en la couplant avec la structure resolue par cristallographie et les etudes de forme et de taille de modeliser l'ensemble du domaine necessaire a l'activite de transcription et ainsi de mieux apprehender les mecanismes d'action et les contacts entre les proteines impliquees dans la synthese d'arn par le virus.


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Informations

  • Détails : 137 p.
  • Annexes : 75 ref.

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