Le cytochrome b₅₅₈ : cœur membranaire rédox de la NADPH oxydase

par Marie-Hélène Paclet

Thèse de doctorat en Sciences de la vie et de la santé

Sous la direction de Françoise Morel.

Soutenue en 2000

à l'Université Joseph Fourier (Grenoble) , en partenariat avec Groupe de recherche et d'étude du processus inflamatoire (GREPI, EA2938/JE 2173, UJF(laboratoire d'enzymologie)-CHU Genoble) (laboratoire) .

Le président du jury était Pierre Vignais.


  • Résumé

    Le cytochrome b₅₅₈ du complexe de la NADPH oxydase génère des ions superoxyde grâce à un transfert d'électrons du NADPH vers l'oxygène. La NADPH oxydase dormante et dissociée dans les cellules au repos dépend pour fonctionner de l'assemblage de protéines cytosoliques (p47-phox, p67-phox, p40-phox et Rac) sur le constituant membranaire redox, le flavocytochrome b₅₅₈, hétérodimère forme de deux sous-unités gp91-phox glycosylée et p22-phox. Actuellement, les modalités de transfert des électrons au niveau du cytochrome b₅₅₈ ainsi que les mécanismes d'assemblage des facteurs cytosoliques restent méconnus. Pour aborder ces aspects nous avons utilisé deux modèles : le lymphocyte B-EBV : qui exprime tous les composants de la NADPH oxydase mais dont l'activité oxydase est réduite, et le neutrophile qui sert de référence. 1) le cytochrome b₅₅₈ a été isole et purifie à partir des membranes de LB-EBV. Il est le facteur limitant l'activité oxydase dans ces cellules lorsqu'il est inséré dans les membranes, mais une fois purifie, ses propriétés biochimiques sont semblables à celles du neutrophile 2) sa forte glycosylation dans les LB-EBV n'influence pas l'activité oxydase 3) l'étude des mécanismes d'assemblage des protéines du complexe a été réalisée par deux approches : la reconstitution d'une activité oxydase en milieu acellulaire mettant en contact le cytochrome b₅₅₈ purifie et les facteurs cytosoliques recombinants, et l'étude par microscopie a force atomique de la topographie de liposomes contenant le cytochrome b₅₅₈ après assemblage de la NADPH oxydase. Les résultats montrent une augmentation de la taille des liposomes après assemblage des facteurs cytosoliques suggérant que in vitro, la transition de l'état inactif vers l'état actif pourrait faire intervenir un processus de régulation conformationnelle dans lequel p67-phox jouerait un rôle central. Ce travail se poursuit avec un nouveau modèle, dictyostelium discoideum chez qui nous avons caractérisé une activité NADPH oxydase.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (183-26 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 163-181 (233 ref.)

Où se trouve cette thèse\u00a0?

  • Bibliothèque : Service interétablissements de Documentation (Saint-Martin d'Hères, Isère). Bibliothèque universitaire Joseph-Fourier.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS00/GRE1/0018
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