Cryopréservation de neurones embryonnaires humains et animaux dans une perspective de transplantation

par Didier Petite

Thèse de doctorat en ?

Sous la direction de Alain Privat.

Soutenue en 2000

à Paris, EPHE .


  • Résumé

    Après mise au point de la technique de cryopréservation de tissus nerveux qui comprend la congélation sous forme de fragments, suivie d'une simple dissociation mécanique, et un taux plus élevé de sérum et de glucose dans les différents milieux, nous avons montré que les neurones et les cellules gliales humaines et animales cryopréservés sont, après culture in vitro et marquage immunocytochimique, semblabes à leurs homologues frais. Une analyse morphométrique a permis de distinguer deux types de neurones GABA-IR (à petit et à grand champ neuritique ) dans le cortex cérébral et le mésencéphale de rat embryonnaire qu'ils soient frais ou cryopréservés. De même, nous avons montré un champ dendritique plus grand dans les cellules DA-IR cryopreservées du mésencéphale et un champ axonal plus grand pour les cellules 5HT-IR cryopréservées du rhombencéphale. Des tests de toxicité chronique et aigue ont permis de mettre en évidence une neuroprotection, par la TCP pour les cellules corticales,et par la BTCP pour les cellules mésencéphaliques au même titre que les cellules fraîches. Les essais de transplantation des cellules cryopréservées du rhombencéphale embryonnaire dans des moelles de rat sectionnées totalement, ont permis de constater une réinnervation plus importante et des tests de locomotion fictive plus performants surtout après greffe d'un mélange à part égale de cellules DA- et 5HT-IR. La technique de cryopréservation décrite dans ce travail et les améliorations qu'elle a permis tant sur le plan de la morphologie des cellules que sur celui des transplantations, représente un moyen sûr et fiable de conserver des échantillons biologiques en vue de stockage et de greffe. Cette technique pourrait permettre des expérimentations, en particulier génétiques, pouvant aboutir à une meilleure connaissance des processus dégénératifs, ainsi qu'à la réparation après un traumatisme ou dans le cas d'une anomalie génétique.

  • Titre traduit

    Cryopreservation of human and animal embryonic neurons in view of transplantation


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Informations

  • Détails : 1 vol. (194 f.)
  • Notes : Publication autorisée par le jury
  • Annexes : Bibliogr. 273 réf.

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  • PEB soumis à condition
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