Etude des proteines kinases et proteines phosphorylees impliquees dans le processus de signalisation cellulaire induit par la cryptogeine, un eliciteur des reactions de defense chez le tabac

par FATMA LECOURIEUX OUAKED

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de ANGELA LEBRUN GARCIA et de Alain Pugin.

Soutenue en 2000

à Dijon .

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  • Résumé

    La transduction du signal induit par la cryptogeine, un eliciteur des reactions de defense chez le tabac (nicotiana tabacum), se fait via des evenements precoces de phosphorylation de proteines. Lors de ce travail, l'induction de ces evenements de signalisation a ete etudiee par utilisation d'inhibiteurs de proteines phosphatases (pp, acide okadaique et calyculine a) et de proteines kinases (pk, staurosporine). Le traitement des cellules de tabac par la cryptogeine ou la calyculine a induit des effets similaires : influx de ca 2 +, efflux de nitrate, alcalinisation extracellulaire et production de formes actives de l'oxygene (fao). A l'oppose, le traitement par la staurosporine inhibe ces evenements. Ces resultats suggerent que la transduction du signal eliciteur necessite, via l'activation de pk et/ou l'inhibition de pp, une augmentation du taux de phosphorylation de proteines impliquees dans la signalisation cellulaire. Les proteines phosphorylees in vivo ( 3 2p) dans les cellules de tabac par la cryptogeine, la staurosporine ou la calyculine a pendant des temps courts, ont ete analysees par electrophorese bi-dimensionnelle. Le traitement par la cryptogeine induit une augmentation du niveau de phosphorylation de 19 polypeptides. Parmi eux, 12 ont une phosphorylation ca 2 +-dependante. La staurosporine inhibe les phosphorylations induites par la cryptogeine alors que la calyculine a active la phosphorylation de 18 des polypeptides phosphoryles par la cryptogeine. Ces polypeptides ont ete caracterises par leurs mm et pi. Deux ont ete partiellement sequences et ne correspondent a aucune proteine connue. Nous avons donc tente le clonage de leurs genes par pcr, une demarche qui n'a pas aboutie. Parallelement, nous avons mis en evidence, l'implication de deux homologues de mapk (mitogen-activated pk) de 46 et 50 kda dans le processus de signalisation de la cryptogeine. Elles sont activees par phosphorylation, leur activation est ca 2 +-dependante et independante de la production de fao.

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Informations

  • Détails : 162 p.
  • Annexes : 579 ref.

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