Recherche Avancée

Thèse soutenue

L'interaction tabac / Phytophthora : dissection d'un modèle complexe

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Auteur / Autrice : Sébastien Vauthrin
Direction : Jean-Pierre Blein
Type : Thèse de doctorat
Discipline(s) : Biochimie, biologie cellulaire et moléculaire
Date : Soutenance en 2000
Etablissement(s) : Dijon

Résumé

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Les élicitines, protéines sécrétées par les champignons du genre phytophthora, élicitent les mécanismes de défense du tabac, Nicotiana tabacum var. Xanthi, sur plante entière et sur suspension cellulaire. Ces protéines présentent également une activité de protéines de transfert de stérol. Au cours de ce travail, nous avons démontré que les élicitines sont capables de transférer des stérols entre des liposomes, des micelles et également entre des membranes biologiques. La mutagenèse dirigée du gène x24 codant la cryptogéine, afin de remplacer les résidus tyrosines intervenant dans la liaison du stérol a l'élicitine, nous a permis d'obtenir des élicitines aux capacités plus ou moins réduites à interagir avec des stérols. Nous avons ainsi pu démontrer l'existence d'une relation entre cette fonction et la capacité de fixation des élicitines sur leur site de fixation spécifique situé sur la membrane plasmique des cellules de tabac. C'est en fait un complexe élicitine-stérol qui se fixe sur ces sites et non une élicitine non chargée. Nous avons ensuite démontré l'existence d'une relation entre la capacité de fixation des élicitines sur leurs sites à haute affinité et la capacité de ces protéines à induire les mécanismes de défense sur suspension cellulaire de tabac. Nous avons ainsi relié l'induction des mécanismes de défense et la fixation des élicitines sur ce qui semble donc être leur récepteur membranaire capable de transmettre un signal du milieu extracellulaire vers le milieu intracellulaire. Nous avons par la suite étudié la capacité des élicitines à interagir avec d'autres lipides. Nous avons montré que les élicitines interagissent avec des acides gras et des phospholipides, transférant ces derniers entre des liposomes. Les élicitines semblent ainsi former une famille de protéines de transfert de lipides. Tout comme pour les stérols, ces autres lipides pourraient jouer un rôle dans la reconnaissance de l'élicitine par son récepteur. Enfin, le clonage, par la méthode du double hybride, de l’ADNc codant ce récepteur a permis de mettre en évidence la présence de plusieurs protéines affines pour la cryptogéine. Toutes ces protéines sont de nature intracellulaire, laissant envisage une éventuelle internalisation de l'élicitine dans les cellules végétales.