Caractérisation moléculaire et fonctionnelle d'un anticorps catalytique anti-idiotypique à activité beta-lactamase

par Hélène Debat

Thèse de doctorat en Génie enzymatique, bioconversion et microbiologie

Sous la direction de Daniel Thomas.

Soutenue en 1998

à Compiègne .


  • Résumé

    Un anticorps catalytique monoclonal (abzyme) à activité beta-lactamase a été généré par la méthode de l'empreinte moléculaire, approche originale s'appuyant sur le concept du réseau idiotypique. La première étape consiste à obtenir un anticorps monoclonal AB1 dirige contre le site actif de l'enzyme, ayant ainsi des propriétés inhibitrices. Cet AB1 peut alors être utilisé comme antigène pour obtenir un anticorps AB2 qui devient alors l'image interne du site actif de l'enzyme de départ utilisée comme modèle. Cet abzyme est donc un anticorps dont les régions hypervariables sont non seulement dévolues à la reconnaissance spécifique de l'antigène mais confèrent de plus à la molécule une activité catalytique de type enzymatique. L'objectif de ce travail a été de caractériser le mécanisme catalytique de cet anticorps catalytique anti-idiotypique à activité beta-lactamase. Cette caractérisation s'appuie d'une part sur l'étude de l'anticorps de première génération et d'autre part sur l'étude moléculaire et fonctionnelle de l'anticorps de deuxième génération en utilisant les techniques de génie génétique. Ainsi, la caractérisation moléculaire et fonctionnelle de cet anticorps catalytique a permis de définir les résidus potentiellement impliqués dans le mécanisme de type abzymatique. Il s'agit des résidus serl26, serl28, lysl27 (cdr1) et glul98 (cdr3) portes par la chaine légère. De plus, l'analyse des séquences des chaines légères et lourdes de l'anticorps suggère que les anticorps catalytiques produits par la voie du réseau idiotypique pourraient avoir un lien avec les autoanticorps rencontres dans le cadre de maladies autoimmunes. Enfin, le clonage et l'expression chez E. Coli des fragments d'anticorps SCFV ont permis de retrouver une activité catalytique in vivo, laissant la perspective d'une étude encourageante sur la caractérisation moléculaire de l'activité beta-lactamase de l'anticorps sous sa forme minimale.

  • Titre traduit

    Molecular and functional charaterization of an anti-idiotypic catalytic antibody with a beta-lactamase like activity


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Informations

  • Détails : 1 vol. (130 p.)
  • Annexes : 318 ref.

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  • Bibliothèque : Université de Technologie de Compiègne. Service Commun de la Documentation.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 2000 DEB 1288
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