Caracterisation du gene hote du petit arn nucleolaire u19. Implication des snoarn h/aca dans la pseudouridylation de l'arn ribosomique

par MARIE-LINE BORTOLIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Tamás Kiss.

Soutenue en 1999

à Toulouse 3 .

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  • Résumé

    Les differentes etapes de la biogenese des ribosomes font intervenir des facteurs en trans et notamment des petits arn nucleolaires (ou snoarn). Certains d'entre eux sont impliques dans les etapes de clivage du precurseur ribosomique, mais la majorite sont requis pour les modifications post-transcriptionnelles de ce dernier (essentiellement des methylations en 2-o-ribose et des pseudouridylations). Les snoarn sont pour la plupart exprimes a partir d'introns de genes hotes codant pour des proteines ribosomiques ou nucleolaires. Au cours de ma these, j'ai clone le snoarn u19 murin par rt-pcr et participe a l'analyse de sa structure secondaire par utilisation de sondes chimiques et enzymatiques. L'analyse de ce snoarn nous a permis de le classer parmi les membres d'une famille appelee famille de snoarn a boites h/aca. Par criblage de banques nous avons identifie l'adn complementaire correspondant a l'expression du gene hote de u19. L'analyse informatique de cette sequence n'a revele aucun cadre de lecture significatif, bien qu'il soit episse, polyadenyle, nucleaire et metaboliquement stable. C'est donc un arn non codant comme il avait deja ete decrit dans la litterature. Notre equipe a joue un role important dans l'implication de la famille des snoarn h/aca dans la formation des pseudouridines. Par des experiences de transfections transitoires de minigenes ribosomiques j'ai montre qu'il n'existe qu'aucune sequence consensus ni structure secondaire, sur le precurseur ribosomique, capable de recruter directement les enzymes responsables des modifications. Par la suite, notre equipe a etabli un modele impliquant un appariement entre le snoarn et le pre-arnr via des sequences complementaires. En cela, les snoarn jouent un role de guide dans la selection des uridines a convertir en pseudouridines. En combinant une etude de mutagenese systematique sur les snoarn h/aca et une technique specifique nous permettant de cartographier les nucleotides modifies (par modification chimique de l'arnr suivi d'une reverse transcription), j'ai montre que l'integrite de la structure secondaire des snoarn h/aca etait necessaire a la fonctionnalite de ces derniers. Notre equipe vient recemment de demontrer que d'autres types d'arn cellulaires peuvent etre le substrat de snoarn guides tel que le petit arn nucleaire u6 (pour les 2-o-methylations). Ces travaux suggerent que ce dernier pourrait transiter par le nucleole. A ce jour, seules quatre proteines specifiques des snoarn h/aca ont ete caracterisees. Aussi, afin de mieux apprehender les interactions arn-proteines mises en jeu dans ces complexes rnp nous avons adopte une approche d'immunoprecipitation chez s. Cerevisiae en testant systematiquement la capacite de chacune de ces quatre proteines a interagir avec diverses versions de snoarn h/aca mutantes. Ces etudes sont en cours.


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Informations

  • Détails : 160 p.
  • Annexes : 332 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1999TOU30252
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