Cytotoxicite activites proteolytiques des produits metaboliques de bacteries buccales vis-a-vis de fibroblastes gingivaux in vitro

par Corinne Letzelter

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JEAN PIERRE SOLEILHAVOUP.

Soutenue en 1999

à Toulouse 3 .

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  • Résumé

    Le but de notre travail a ete d'evaluer la cytotoxicite et l'activite proteolytique des toxines liberees dans leur milieu de culture (milieu schaedler) par 5 souches de bacteries frequemment rencontrees dans l'endodonte infecte : prevotella nigrescens, peptostreptococcus micros, capnocytophaga ochracea, fusobacterium necrophorum et fusobacterium russii et 2 souches qui en sont generalement absentes : fusobacterium nucleatum polymorphum et actinobacillus actinomycetemcomitans. Les surnageants de culture de ces bacteries, dilues au 1/10 dans le milieu de culture des fibroblastes (mem + 10%svf), entrainent des inhibitions de proliferation des fibroblastes gingivaux dont l'intensite peut etre classee comme suit : 10 a 20% pour p. Nigrescens, c. Ochracea et p. Micros, 100% pour les 3 souches de fusobacterium. Le surnageant le plus toxique est celui de a. Actinomycetemcomitans (100% d'inhibition pour une dilution au 1/1000). L'activite proteolytique des surnageants bacteriens vis a vis de la fibronectine et du collagene i, principales macromolecules constituant la matrice extracellulaire des cultures de fibroblastes a confluence, a ete recherchee par immunofluorescence indirecte. Aucune activite proteolytique n'a ete detectee dans les surnageants d'a. Actinomycetemcomitans, p. Micros et c. Ochracea. Les surnageants de p. Nigrescens et f. Necrophorum ont entraine une lyse incomplete des fibrilles de collagene i. Seul l'inhibiteur de protease, pmsf, a partiellement inhibe l'activite collagenolytique de ces surnageants, suggerant la participation d'une serine protease. Une metalloprotease telle que l'elastase n'est pas impliquee et la presence de collagenase n'a pu etre demontree. Une degradation totale du reseau de fibronectine a ete observee avec les surnageants de p. Nigrescens et f. Necrophorum, elle etait plus moderee avec les 2 autres souches de fusobacterium. Ces activites proteolytique ont ete totalement inhibee par la chaleur, le svf et +/- partiellement par le pmsf selon les souches bacteriennes. La leupeptine, l'aprotinine, la pepstatine et l'inhibiteur de trypsine du soja n'ont aucun effet. L'immunodetection sur western blot des produits de proteolyse de la fibronectine a montre que les enzymes de p. Nigrescens et f. Necrophorum entrainaient la disparition des dimeres de 440 kda et l'apparition de fragments de proteolyse de 180 kda pour p. Nigrescens, 120 kda pour f. Nucleatum polymorphum et de 70 a 210 kda pour f. Necrophorum. L'ensemble des resultats est en faveur de la presence de proteases differentes dans les divers surnageants bacteriens etudies. Tous les surnageants bacteriens ont induit une chute de l'activite de la phosphatase alcaline des fibroblastes gingivaux (differencies en preosteoblastes) et une augmentation de l'activite de la phosphatase acide.


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Informations

  • Détails : 125 p.
  • Annexes : 204 ref.

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  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1999TOU30092
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