Le facteur d'activation de la transcription staf : genes cibles et mode de liaison au dna

par MYRIAM SCHAUB

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Philippe Carbon.

Soutenue en 1999

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) .

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  • Résumé

    La proteine staf a ete identifiee comme l'activateur transcriptionnel du gene du trna s e c. Staf se lie de maniere sequence-specifique a son site par l'intermediaire de son domaine de liaison contenu dans sept motifs en doigts de zinc du type c2h2. Le promoteur de base du gene du trna s e c differe de celui des autres genes de trna. Il se rapproche des promoteurs de base des genes du type snrna transcrits par les rna polymerases ii ou iii. A cause de ces similitudes structurales, nous avons cherche a savoir si staf est impliquee dans l'activation transcriptionnelle de ces genes. Par differentes approches in vitro et in vivo (tests de fixation au dna et microinjections dans les oocytes de xenope), nous avons demontre que staf est un facteur cle dans l'activation transcriptionnelle des genes du type snrna. Des experiences de selection de sites nous ont permis de degager une sequence consensus de 21 pb pour le site de liaison. La comparaison des sequences des sites de liaison de la proteine presents dans les genes cibles caracterises a revele de substantielles divergences. Nous avons demontre que pour reconnaitre tous ses sites, staf utilise de maniere relativement flexible ses sept doigts de zinc. Par differentes experiences (empreintes a la dnase i, interferences aux radicaux hydroxyles et selection de sites), l'etude des interactions entre des domaines de liaison tronques et trois sites (sites du trna s e c, du snrna u6 et site optimal) a ete menee et les resultats compares a ceux obtenus avec le domaine de liaison sauvage. Nous avons demontre que staf est capable d'utiliser de maniere flexible ses doigts de zinc 1 et 7 in vitro dans le contexte des trois sites, et que de surcroit cette flexibilite a une importance fonctionnelle in vivo pour l'optimisation de l'activite transcriptionnelle. L'ensemble de nos resultats nous ont permis de proposer un modele d'interaction entre staf et les trois sites etudies base egalement sur les donnees des structures tridimensionnelles.


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Informations

  • Détails : 188 p.
  • Annexes : 471 ref.

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