Etudes structurales d'arnt mitochondriaux humains relies a des pathologies : importance particuliere des modifications post-transcriptionnelles

par MARK HELM

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Richard Giegé.

Soutenue en 1999

à l'Université Louis Pasteur (Strasbourg) .

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  • Résumé

    L'objectif de cette these a ete de contribuer a la comprehension de mecanismes moleculaires pathologiques de mutations dans des arnt mitochondriaux (mt) humains. Nous avons principalement explore les possibilites de perturbations structurales induites par les mutations au niveau de differents arnt. Les resultats concernent en grande partie des connaissances fondamentales structurales des arnt mt, qui ont ete etudies par analyse phylogenetique, sequencage, fusion thermique et sondage en solution. La comparaison phylogenetique de 520 arnt provenant de 26 genomes mt de mammiferes, a permis d'elargir nos connaissances quant aux caracteristiques structurales propres aux arnt d'une specificite donnee et aux elements typiquement mitochondriaux. Nos etudes d'arnt natifs, ainsi que d'arnt transcrits in vitro, ont revele une importance structurale primordiale des modifications posttranscriptionnelles. L'arnt l y s, transcrit in vitro presente un repliement inattendu en tige-boucle extensee, alors que l'arnt l y s natif possede une structure secondaire en feuille de trefle. L'analyse de variants et d'un arnt chimerique ne possedant qu'une seule modification a identifie un role predominant de la methylation de l'adenine 9 dans le repliement de cet arnt. L'implication des mutations pathologiques sur les taux de modifications post-transcriptionnelles ete exploree par comparaison des taux de bases modifiees dans des couples d'arnt sauvages et mutes, extraits de cellules humaines en culture (cybrides). Alors que les arnt l y s ne sont pas affectes, l'arnt l e u mute presente une diminution de 50% de l'une des modifications. Le criblage structural systematique par fusion thermique de couples d'arnt sauvages et mutes (specificites gly, ile, pro, ser et thr) transcrits in vitro, a permis la focalisation des analyses consecutives sur une mutation pathologique dans arnt t h r, qui induit un retrecissement de la boucle anticodon. Dans le cadre des analyses structurales, deux nouvelles sondes ont ete definies. Il s'agit d'une part de l'activite ribonucleasique d'anticorps humains et d'autre part, d'un derive de la lexitropsine. Les caracteristiques de ces sondes laissent envisager leur application dans la conception de sondes structurales originales presentant des specificites nouvelles.


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Informations

  • Détails : 320 p.
  • Annexes : 260 ref.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
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