Clonage, analyse des genes d'adn polymerases et des inteines d'isolats de la famille des thermococcales. Applications taxonomiques et biotechnologiques

par Joël Quérellou

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de PATRICK FORTERRE.

Soutenue en 1999

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Une dizaine d'isolats archaebacteriens ont ete selectionnes dans le cadre d'un programme de recherche sur les adn polymerases thermostables. Une breve synthese sur les genres pyrococcus et thermococcus est suivie d'un rappel sur les adn polymerases thermostables et sur les inteines correspondantes. Les isolats retenus sont pyrococcus abyssi, p. Sp. Ge23, p. Glycovorans, p. Sp. Al646, p. St700 ainsi que thermococcus fumicolans, t. Hydrothermalis, t. Sp. Ge8 et t. Sp. Ge20. La strategie d'obtention des sequences des genes des adn polymerases repose sur le clonage de tout ou partie des genes d'interet et sur une methode de marche sur le chromosome. Les sequences des genes d'adnr 16s des isolats correspondants ont ete obtenues a partir de produits resultant de clonage ou de pcr. Les sequences de six adn polymerases ont ete obtenues (p. Abyssi, p. Sp. Ge23, t. Fumicolans ; p. Glycovorans, p. Sp. Al646 et t. Sp. Ge8) ainsi que trois sequences partielles (p. Sp. St700, t. Hydrothermalis et t. Chitonophagus). L'analyse comparee des sequences d'adnr 16s, des adn polymerases et les inferences phylogenetiques qui peuvent en etre deduites, mettent en evidence une convergence des resultats. Il est propose de reclasser deux autres isolats anterieurement decrits. Ainsi t. Chitonophagus est a reclasser dans le genre pyrococcus et p. Kodakaraensis dans le genre thermococcus. Les genes des adn polymerases des isolats consideres du genre thermococcus sont morceles et comportent des sequences codant pour des inteines. Les proprietes originales de thermostabilite des adn polymerases issues du genre pyrococcus ont pu etre exploitees en pcr inverse a haute temperature (ht-ipcr). Celle de p. Abyssi se revele particulierement efficace jusqu'a des temperatures de 85\c. L'aptitude de plusieurs de ces adn polymerases recombinantes a pu etre testee en pcr. Trois de ces enzymes sont commercialises.


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  • Détails : 241 p.
  • Annexes : 257 ref.

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  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-014503
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