Photomarquage d'affinite : etude de la melibiose permease et marquage par le tritium des 3-(trifluoromethyl)-3-phenyldiazirines

par YVES AMBROISE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Charles Mioskowski.

Soutenue en 1999

à PARIS 11, ORSAY .

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  • Résumé

    Dans une premiere partie, nous decrivons que le site d'interaction melibiose/melibiose permease peut etre efficacement cartographie par le substrat de haute affinite 3h-para-azidophenyl--d-galactopyranoside. Des vesicules membranaires contenant la melibiose permease etiquetee poly-histidine ont ete illuminees par lumiere uv. L'analyse de l'incorporation de radioactivite sur la proteine a montre que dix pour cent des sites actifs de la proteine ont ete marques, et que ce marquage est completement inhibe par le melibiose. La purification des peptides marques et la localisation de la radioactivite ont montres que l'arginine-141, comprise dans la boucle cytoplasmique 4-5 de la proteine etait radioactive. L'ensemble du travail suggere fortement que l'arginine-141 fait partie du site de fixation melibiose/melibiose permease, et mets en exergue l'importance de ce domaine dans la fixation du substrat pour les autres transporteurs polytopiques de la meme famille. Dans une deuxieme partie, nous decrivons qu'une methode classique d'hydrogenolyse catalytique peut etre appliquee au marquage par le tritium des 3-(trifluoromethyl)-3-phenyldiazirines. Nous demontrons que cette methode est hautement selective vis a vis de la plupart des groupements facilement reductibles, donnant ainsi la possibilite de marquer des molecules fragiles en derniere etape de synthese avec de tres fortes activites specifiques.

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Informations

  • Détails : 177 p.
  • Annexes : 173 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-014294
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