Proprietes physiques des liposomes asymetriques. Etude par resonance magnetique nucleaire et microscopie electronique

• Auteur / Autrice : Mounir Traïkia
• Direction : Philippe F. Devaux
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques fondamentales et appliquées
• Date : Soutenance en 1999
• Etablissement(s) : Paris 7

Résumé

Ce travail porte sur l'etude dans des liposomes unilamellaires, des consequences physiques de l'asymetrie transmembranaire. La reponse a la creation d'une asymetrie par addition selective de phospholipides sur un des feuillets depend de la taille de la vesicule : une grande vesicule evolue en changeant de morphologie de maniere importante tout en gardant une membrane dans un etat relaxe. Une petite vesicule devrait avoir une reponse differente : creation d'une tension laterale importante au sein de la membrane avec un changement de morphologie limite. Les travaux precedents au laboratoire ont ete effectues sur des vesicules geantes (guv) de diametre > 10 m dont la morphologie peut etre modifiee par l'insertion de tres petites quantites de lysophosphatidylcholine (< 1% mol). J'ai travaille sur des vesicules lipidiques unilamellaires, de taille comprise entre une centaine de nm et 1 m, obtenues soit par congelation/decongelation (ftv) soit par reversion de phase (luv), et sur des petites vesicules (20 - 30 nm de diametre) obtenues par ultrasons. J'ai caracterise les liposomes unilamellaires obtenus par des cycles de congelation/decongelation du point de vue morphologique et de distribution de taille, grace a la microscopie electronique et la rmn- 3 1p large bande. Le deplacement chimique en rmn- 3 1p de l'acide phosphatidique insere en membrane a ete utilise comme sonde de la tension laterale. Pour obtenir des spectres a haute resolution avec les vesicules lipidiques de taille moyenne, j'ai adapte la technique rmn en rotation a l'angle magique (mas). L'incorporation asymetrique de lpc ( 5 - 10% mol) sur ces vesicules entraine non seulement un leger changement de leur morphologie, mais encore la repartition de la tension laterale induite sur toute la membrane par couplage des deux feuillets de la bicouche lipidique. Ceci conforte la theorie de la membrane elastique mecaniquement couplee developpee par sheetz et singer.