Etude du triage des lipoproteines chez escherichia coli

par ANKE SEYDEL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées. Sciences médicales

Sous la direction de Anthony Pugsley.

Soutenue en 1999

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Nous etudions la mise en place des lipoproteines dans l'enveloppe d'escherichia coli, une bacterie a gram negatif. Grace a un peptide signal n-terminal, les lipoproteines traversent la membrane cytoplasmique par la voie d'exportation sec. Apres clivage par la lipoproteine signal peptidase, trois acides gras attaches a la cysteine n-terminale permettent l'ancrage de la lipoproteine dans la membrane externe en general, mais parfois dans la membrane cytoplasmique. La localisation des lipoproteines serait determinee par un signal de triage constitue par l'acide amine en position +2 de la proteine mature. Les lipoproteines n'ayant pas d'aspartate en position +2 (d+2) seraient localisees dans la membrane externe par une machinerie de triage composee de lola et lolb. Afin d'identifier d'autres facteurs impliques dans le triage des lipoproteines, nous avons mis au point un systeme genetique pour selectionner les mutations affectant le triage des lipoproteines vers la membrane externe en utilisant la proteine periplasmique affine du maltose, male. Nous avons construit des lipoproteines modeles composees d'un peptide signal d'une lipoproteine, d'un signal de triage pour la membrane externe (s+2) ou cytoplsmique (d+2) et de male comme rapporteur. Les souches exprimant lipomale avec (d+2) poussent sur maltose, tandis que celles avec (s+2) non. Une mutagenese chimique suivie d'une selection des mutants capables d'utiliser le maltose nous a permis d'identifier deux classes de mutants : un seul mutant de classe i, portant une mutation remplacant la serine +2 par une phenylalanine. Une mutagenese systematique de l'acide amine en position +2 de lipomale revele que des variants avec des acides amines tryptophane, tyrosine, glycine ou proline restent aussi dans la membrane cytoplasmique. L'analyse du genome d'e. Coli k-12 indique que ces acides amines sont rarement utilises en position +2 des lipoproteines. Les mutants de la classe ii ont des mutations chromosomiques causant une delocalisation partielle de lipomale. Par complementation, nous avons montre pour des mutants differents que la mutation n'est ni dans lola ni dans lolb, ce qui suggere que d'autres proteines pourraient etre impliquees dans le triage.


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  • Détails : 139 p.
  • Annexes : 221 ref.

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  • Cote : TS1999

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