Biosynthese et stabilite conformationnelle de l'acetylcholinesterase

par NATHALIE MOREL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Jean Massoulié.

Soutenue en 1999

à Paris 7 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Nous nous sommes interesses a divers aspects concernant la biosynthese, la structure et la stabilite conformationnelle de l'acetylcholinesterase (ache). Dans une premiere partie, nous avons cherche a mettre au point un nouveau systeme d'expression qui permette de produire suffisamment d'ache de vertebres pour des analyses physico-chimiques. Nous avons exprime les ache de rat et de venin de bungare dans la levure pichia pastoris et nous avons etudie l'influence du signal de secretion sur le taux de production de l'enzyme. Les meilleurs taux d'expression ont ete obtenus avec les peptides signaux naturels des ache de rat et de bungare. Nous avons egalement exprime ces enzymes dans d'autres systemes et nous avons observe que l'ache de bungare est systematiquement produite a un niveau plus eleve que l'ache de rat. En utilisant des chimeres rat/bungare et des constructions cat, nous avons montre qu'un fragment 5 de region codante de l'ache de bungare contient plusieurs elements activateurs qui permettent d'augmenter la transcription controlee par le promoteur enhancer cmv. Dans la deuxieme partie, nous nous sommes interesses a l'effet de mutations de residus situes dans le site peripherique, a l'entree de la gorge catalytique, sur la stabilite de l'ache de torpille. L'analyse de la structure tridimensionnelle de l'ache de torpille montre que le domaine catalytique peut etre subdivise en deux sous-domaines structuraux. La boucle w279-s291, localisee dans le domaine 1, etablit de nombreuses interactions avec le domaine 2, de l'autre cote de la gorge. La mutation de residus situes dans cette boucle rend l'enzyme plus sensible a la denaturation thermique et a l'inactivation chimique par la dithiopyridine, ce qui peut s'interpreter par le fait qu'une modification de la conformation de la boucle affaiblit les interactions entre les deux sous-domaines de l'ache. La cohesion entre les deux sous-domaines semble donc jouer un role important dans la stabilite de la sous-unite catalytique de l'ache. Dans la troisieme partie, nous avons etudie le role des deux helices 7 , 8 et 1 0 du domaine catalytique sur la biosynthese, la secretion et la stabilite des differentes formes moleculaires de l'ache. Nous avons montre que l'interaction entre deux sous-unites, au niveau des deux helices 7 , 8 et 1 0, est importante pour la formation et la stabilite des oligomeres d'ache. Dans le cas des sous-unites ache t, la dimerisation est requise pour la secretion et semble egalement necessaire pour l'association de ces sous-unites avec la sous-unite structurale, colq. Par ailleurs nous avons montre que le peptide c-terminal t de l'ache t constitue un signal de degradation pour les sous-unites ache t non oligomerisees.


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 227 p.
  • Annexes : 140 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1999
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.