Application du procede spie-ia au dosage du leucotriene c4, de l'angiotensine ii et de l'histamine

par HERVE VOLLAND

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de CHRISTOPHE CREMINON.

Soutenue en 1999

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Ce travail de these a ete consacre a la mise au point de dosages immunologiques pour trois haptenes de nature differente : le leucotriene c4 ; l'angiotensine ii et l'histamine. Ce travail avait pour objectif la valorisation et l'amelioration de nos connaissances sur le procede spie-ia. Dans le cas du ltc 4, le dosage par spie-ia repose sur une methode d'immobilisation chimique classique. Ce dosage presente une bonne sensibilite mais similaire a celle d'un dosage par competition, ce qui limite son application industrielle. Dans le cas de l'angiotensine ii, nous avons developpe l'ensemble des dosages au format immunometrique existant, le spie-ia en employant 3 voies differentes d'immobilisation et le dosage immunometrique a deux sites. L'optimisation du spie-ia par voie chimique a conduit a la commercialisation d'une trousse de dosage depuis deux ans. L'emploi de l'irradiation uv pour l'immobilisation a montre l'existence de deux phenomenes concomitants et contradictoires : liaison covalente et photolyse. D'autre part le dosage immunometrique a deux sites developpe constitue l'exemple du plus petit haptene dose a ce jour par cette methode. En ce qui concerne l'histamine, une bonne reconnaissance par les anticorps necessite une etape de derivation prealable de l'haptene. Differentes voies d'approches se sont revelees tres efficaces dans des milieux simples en fournissant de tres bonne sensibilite. Cependant un dosage direct d'echantillons plasmatiques n'a pour l'instant pas pu etre realise car cela necessite de tres fortes concentrations en reactif de derivation pour obtenir un bon rendement, ce qui altere les performances du dosage. Cependant un nouveau protocole d'immobilisation par voie radicalaire a ete initie dont les perspectives d'application semblent tres interessantes. Enfin nous avons developpe un dosage par competition qui se revele deja fonctionnel sur des extraits de cerveau et presente des resultats encourageants sur les echantillons plasmatiques.


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Informations

  • Détails : 356 p.
  • Annexes : 195 ref.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1999
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