Caracterisation d'une -d-galactosidase acide d'achatine strictement specifique du seul residu -d-galactosyle. Applications potentielles

par GAEL PLACIER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Bernard Colas.

Soutenue en 1999

à Nantes .

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  • Résumé

    La valorisation des macromolecules necessite de diversifier les outils enzymatiques, ce qui passe par la recherche de nouvelles activites a specificite originale et par une meilleure connaissance de leurs mecanismes. Ces enzymes doivent permettre de developper des strategies originales de modifications enzymatiques des macromolecules (polysaccharides, proteines,) et conduire, par la creation de nouvelles applications, a de nouveaux debouches pour ces macromolecules. Une nouvelle -galactosidase acide (e. C. : 3. 2. 1. 23), isolee a partir du suc digestif du mollusque d'achatine, a ete purifiee par une serie de chromatographies (echangeurs d'ions, gel-filtration, hydroxyapatite). Cette enzyme est soluble comme les -galactosidases cytosoliques, fonctionne a ph acide comme les enzymes lysosomales mais differe de toutes les autres -galactosidases animales solubles par sa tres haute specificite pour le seul residu -d-galactosyle et la liaison 14. L'activite d'hydrolyse optimale de l'enzyme, situee a ph 3,2, est fortement influencee par la force ionique du milieu. De plus, elle est capable de catalyser, a ph 5,0, des reactions de transglycosylation. La -galactosidase acide est une glycoproteine de 90 kda, constituee d'une partie carbohydratee de 6% (p/p). Elle contient une grande quantite d'acides amines acides/ amides et hydroxyles mais une faible quantite d'acides amines basiques. L'analyse de la sequence n-terminale et de deux peptides internes de l'enzyme montre une forte homologie de la -galactosidase acide avec la famille 59 des galactosylceramidases (e. C. : 3. 2. 1. 46). A la vue de sa tres haute specificite et de ses caracteristiques cinetiques, la -galactosidase acide est un outil de choix non seulement dans l'etude de la determination des structures primaires des copules glucidiques des glycoconjuges mais aussi pour la synthese de neoglycoconjugues. Ainsi, l'enzyme est en particulier capable de catalyser la galactosylation de residus d'amino acides hydroxyles.


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  • Détails : 193 p.
  • Annexes : 309 ref.

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