Ciblage spécifique des acides nucléiques dans un contexte cellulaire par des oligonucléotides : modulation de l'expression génique et autres utilisations fonctionnelles

par Marcella Faria

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Thérèse Garestier-Hélène.

Soutenue en 1999

à Paris, Muséum national d'histoire naturelle .

Le président du jury était Claude Hélène.

Le jury était composé de Barbara Demeneix, Miroslav Radman, David Tidd, Carine Giovannangeli.

Les rapporteurs étaient Chantal Ehresmann, Michel Monsigny.

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  • Résumé

    Un oligonucléotide de synthèse peut reconnaitre spécifiquement les bases puriques d'une séquence oligopyrimidine_oligopurine sur une double hélice d'adn par la formation d'une triple-hélice locale, ou une séquence complémentaire sur un arn messager, et ainsi moduler l'expression génique : ce sont les stratégies anti-gène et antisens, respectivement. Une séquence de 16 purines présente dans le génome du virus hiv-1 (ppt) a été choisie comme cible pour des oligonucléotides phosphoramidates (une modification chimique qui stabilise les complexes formes) ; ces oligonucléotides sont capables d'interférer avec la transcription et la traduction dans un contexte cellulaire. Le mécanisme d'action des oligonucléotides étudiés est démontré par l'analyse comparative de leur effet sur différents systèmes cellulaires, dégénérés seulement par la présence de la séquence ciblée : une inhibition de l'élongation de la transcription est démontrée pour les oligonucleotides triple-hélice, et une inhibition de l'initiation de la traduction est vérifiée pour les oligonucléotides antisens. Dans un second temps, les oligonucleotides formant une triple-helice ont été liés de façon covalente a des agents activables (phenanthroline et psoralène) pour rendre les activités de ces agents (induction de coupure et de pontage sur l'adn, respectivement) spécifiques de la séquence ciblée. Les oligonucléotides ainsi modifies peuvent être utilises pour l'inactivation sélective d'un gène, mais aussi comme outils dans le contexte cellulaire. Deux utilisations potentielles sont discutées : sondage de l'accessibilité de la chromatine dans le noyau des cellules vivantes, et quantification de l'activité des analogues non-modifies.

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Informations

  • Détails : 1 vol. (214 p.)
  • Annexes : Bibliogr. 212 ref.

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  • Bibliothèque : Muséum national d'histoire naturelle. Bibliothèque centrale.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : TH 1999 -- 13
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2016-000158
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