Purification d'immunoglobulines G par membrane d'affinité greffée protéine A et protéine A-G

par Olivier Dancette

Thèse de doctorat en Sciences. Génie des procédés

Sous la direction de Joseph Lieto, Catherine Charcosset et de P Blond.

Soutenue en 1999

à Lyon 1 .

Le jury était composé de Joseph Lieto, Catherine Charcosset, P Blond.


  • Résumé

    La chromatographie d'affinite est utilisee pour separer des biomolecules a partir d'un milieu complexe comme un surnageant cellulaire. Dans ce procede, une macromolecule est immobilisee sur un support solide pour reconnaitre la molecule en solution que l'on cherche a purifier. Des gels et des particules conditionnees en colonne sont employes comme support solide. Cependant, la diffusion au sein de ces supports et les faibles pressions que l'on peut utiliser augmentent considerablement les temps de separation. Les membranes microporeuses presentent l'avantage par rapport aux supports classiques de chromatographie d'affinite d'etre incompressibles et d'eliminer les phenomenes de diffusion au sein du support. L'objectif de ce travail est la preparation de membranes microporeuses greffees avec la proteine a ou la proteine a/g. Pour la separation des immunoglobulines g monoclonales de souris contenues dans un surnageant cellulaire. La premiere partie de ce travail concerne la preparation d'une membrane microporeuse, presentant des esters methyliques en surface, greffee la proteine a ou a/g par liaison covalente. Differentes techniques analytiques pour controler les differentes reactions mises en jeu sont presentees. La seconde partie presente la fixation d'immunoglobulines g humaines et de souris. Les conditions experimentales (temps de fixation, de lavage et d'elution, debit) sont etudiees afin d'optimiser la quantite d'immunoglobulines fixees. La purification d'immunoglobulines g contenues dans un surnageant cellulaire concentre est realisee et la purete des immunoglobulines obtenues est verifiee par sds-page. La troisieme partie de ce manuscript presente la modelisation de la fixation d'immunoglobulines g par une membrane d'affinite en utilisant le modele de sarfert et etzel (1997). La comparaison entre courbe de fixation experimentale et modelisee est satisfaisante.


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Informations

  • Détails : 1 vol. (107 f.)
  • Annexes : Bibliogr. f. 91-101

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  • Bibliothèque : Université Claude Bernard (Villeurbanne, Rhône). Service commun de la documentation. BU Sciences.
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