Modelisations moleculaires et mutageneses dirigees de sous-unites catalytiques de proteines kinases ck2 de yarrowia lipolytica et de schizosaccharomyces pombe

par DELPHINE CHAILLOT

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Claude Meunier.

Soutenue en 1999

à l'INAPG .

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  • Résumé

    La phosphorylation est un moyen de modifier les proprietes fonctionnelles d'une proteine permettant des utilisations variees dans des preparations alimentaires. Les proteines kinases sont des enzymes qui phosphorylent des proteines a l'aide de reactifs non toxiques. Parmi celles-ci, la proteine kinase ck2 phosphoryle plus de 160 substrats. Cette kinase utilise l'atp, compose couteux pour les industries, comme donneur de phosphate. Il serait donc interessant de trouver des mutants de la sous-unite catalytique de la ck2 (ck2) utilisant le pyrophosphate comme donneur de phosphate. Pour cela, nous avons modifie des ck2 par mutagenese dirigee par pcr a partir d'amorces mutagenes. Pour identifier les residus d'interet, nous avons construit des modeles moleculaires de phosphofructokinases (pfks) qui utilisent, selon l'organisme qui les produit, l'atp ou le ppi comme donneur de phosphate, ainsi que des modeles de ck2. Les modeles des pfks montrent que la presence conjuguee de trois residus encombre une partie du site actif des ppi-pfks qui est libre chez les atp-pfks. Les residus de ck2, selectionnes par homologie de fonction avec les pfks, appartiennent au site actif et seraient impliques dans la liaison avec les substrats nucleotidiques et peptidiques ainsi qu'avec les cofacteurs. Certaines enzymes mutees ont des caracteristiques interessantes telles que l'augmentation de l'activite pour l'enzyme mutee g48d de y. Lipolytica ou l'inhibition par le mgcl 2 pour g48k et k158a de y. Lipolytica. Les mutants de deletion des parties n- et c- terminales mettent en evidence un role possible de ces parties dans la stabilisation de l'enzyme. Des mutants de l'enzyme de schizosaccharomyces pombe ont ete aussi construits (spg48d, spv53, spi66y, sp158t) mais leurs proprietes cinetiques sont encore a etudier. Nous avons donc identifie plusieurs residus impliques dans l'activite et la specificite de l'enzyme et construit des modeles permettant d'en identifier d'autres.


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  • Détails : 238 p.
  • Annexes : 249 ref.

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