Vers une unite fonctionnelle modele de la sulfite reductase d'escherichia coli

par MAHEL ZEGHOUF

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Marc Fontecave.

Soutenue en 1999

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    La nadph : sulfite reductase assimilatrice (sir) d'escherichia coli catalyse la reduction a 6 electrons du sulfite en sulfure, l'une des etapes cle de la biosynthese de la l-cysteine a partir du sulfate. Sir est une hemoflavoproteine soluble de 780 kda et presente deux types de sous-unites organisees selon une structure 8 4. La composante flavoproteique de l'enzyme, sir-fp, est constituee des huit chaines. Chacune d'elles fixe un fad et un fmn comme groupements prosthetiques et contient un site de reconnaissance pour le nadph. Les quatre chaines forment la partie hemoproteique, sir-hp, et contiennent un site actif original a savoir un centre 4fe-4s et un siroheme lie par un pont -sulfido dont le soufre est apporte par une cysteine de la chaine polypeptidique. Dans ce contexte, nous avons entrepris une strategie de dissection moleculaire afin d'obtenir et d'etudier separement les differents domaines fonctionnels de la sulfite reductase. Ainsi, un polypeptide correspondant au domaine de fixation du fmn, sir-fp23, a ete purifie. Sa caracterisation a permis d'apporter un argument fort supplementaire a l'hypothese evolutive de l'origine de sir. Avec la creation de sir-fp60, une forme monomerique de sir-fp, nous avons obtenu le premier modele simplifie de la composante flavoproteique contenant a la fois les cofacteurs fad et fmn et conservant la majorite des proprietes chimiques et catalytiques de l'enzyme native. Cet outil precieux permet, en combinaison avec la composante hemoproteique, la reconstitution de l'activite sulfite reductase. Aussi, nous possedons desormais un objet biologique pouvant etre considere comme l'unite minimale active. Ce nouveau complexe a ete entierement caracterise sur un plan biochimique et physico-chimique. Il sera a la base des investigations structurales et fonctionnelles futures.


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Informations

  • Détails : 260 p.
  • Annexes : 115 ref.

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