Synthese d'analogues structuraux des nucleosides destines au sequencage d'adn

par FLORENCE RIVIERE NARCIACQ

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de DIDIER MOLKO.

Soutenue en 1999

à Grenoble 1 .

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  • Résumé

    La methode la plus repandue pour analyser la sequence des acides nucleiques est la technique enzymatique dite de terminaison de chaine developpee par sanger et col. Le principal inconvenient de cette methode est son cout, du notamment a la forte valeur ajoutee des terminateurs de chaine utilises. De nombreuses ameliorations ont ete apportees, mais peu concernent la preparation de terminateurs de chaine simples a synthetiser et donc moins onereux. Une partie de ce manuscrit et consacree a la synthese de familles de terminateurs de chaine potentiels appeles morpholinonucleotides. Trois types de molecules ont ainsi ete preparees de facon simple a partir de reactifs commerciaux. Tous les produits purifies ont ete caracterises par differentes techniques analytiques (rmn, spectrometrie de masse). L'etude des proprietes biochimiques de ces composes a ete realisee dans une deuxieme partie. Une serie d'essais d'incorporation enzymatique avec des adn polymerases et une transferase terminale a ete effectuee, montrant que ces composes sont des substrats interessants. Des reactions de sequencage ont ete egalement mises en uvre. Les resultats obtenus indiquent que les morpholinonucleotides sont des terminateurs de chaine incorpores de maniere base-specifique.

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Informations

  • Détails : 242 p.
  • Annexes : 172 ref.

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