Modulation des activites s-adenosylmethionine synthetase et pectine methylesterase chez le lin (linum usitatissimum) par transgenese sens et antisens via agrobacterium tumefaciens

par FREDERIC LAMBLIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Alain David.

Soutenue en 1999

à Amiens .

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  • Résumé

    Dans le but d'augmenter le degre de methylation de macromolecules parietales (pectines), on a transfere chez le lin (linum usitatissimum) le gene sam1 d'arabidopsis thaliana via agrobacterium tumefaciens. Ce gene code pour une s-adenosyl-l-methionine synthetase (sam-s, ec 2. 5. 1. 6) qui catalyse la conversion de la methionine en s-adenosyl-l-methionine. Des lignees de cals et des clones de bourgeons resistants a la kanamycine ont ete obtenus par transformation avec le vecteur binaire po35ssam portant le gene sam1 sous controle du promoteur 35s. Certains bourgeons ont pu s'enraciner sur milieu selectif pour former des vitroplants. La presence des transgenes a ete confirmee par pcr, suivie dans le cas du gene sam1 par une hybridation avec une sonde sam marquee a la digoxygenine. L'activite sam-s a ete determinee dans les lignees de cals et les tiges, feuilles et racines de vitroplants ayant pousse un mois sur milieu selectif. La plupart des lignees de cals transgeniques ont eu une activite sam-s augmentee (jusqu'a 3,2 fois) de maniere significative par rapport aux cals temoins. Dans les vitroplants, l'expression du gene sam1 est associee a une augmentation de l'activite sam-s (jusqu'a 4 fois), mais une forte preference pour les organes riches en tissus conducteurs est maintenue (niveau d'activite sam-s 3 a 4 fois plus eleve dans les racines et les tiges que dans les feuilles). Une seconde strategie pour accroitre le degre de methylesterification des pectines consiste a reguler negativement l'activite pectine methylesterase (pme, ec 3. 1. 1. 11) parietale par transgenese antisens. Dans ce but, un vecteur pbi-pmef a ete construit, portant une sequence de 0,75 kb d'un adnc partiel de pme de lin en orientation antisens et sous controle du promoteur 35s. Des lignees de cals et des clones de vitroplants transgeniques ont ete obtenus (detection de la presence des transgenes par pcr). La plupart des lignees de cals ont montre une activite pme reduite suite a la production d'arn antisens.


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Informations

  • Détails : 144 p.
  • Annexes : 170 ref.

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  • Bibliothèque : Université de Picardie Jules Verne. Bibliothèque universitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
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