La poly (a)polymerase i d'escherichia coli : etude d'une enzyme impliquee dans le controle de la stabilitedes arnm

par LELIA RAYNAL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Agamemnon James Carpousis.

Soutenue en 1998

à Toulouse 3 .

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  • Abstract

    La decouverte de la polyadenylation chez les bacteries date de plus de trente ans. C'est seulement depuis 1992 que son importance est apparue chez les procaryotes. Je me suis interessee au cours de ma these a la poly(a) polymerase i d'e. Coli (pap i), identifiee en 1992. J'ai tout d'abord construit une souche surproduisant la proteine et fait synthetiser un anticorps dirige contre elle. La bonne surproduction d'une pap i active m'a permis, d'une part, d'etudier son activite in vitro en terme de specificite de substrat et de processivite. D'autres constructions m'ont amene a conclure que pap i est toxique pour les cellules quand presente exces. Dans une deuxieme partie de mon travail, j'ai detecte une interaction de pap i avec differents partenaires : plusieurs membres de la famille des arn helicases a boite dead existant chez e. Coli et egalement avec la ribonuclease e, l'endonuclease majeure impliquee dans la degradation des arnm chez e. Coli. Enfin, un troisieme aspect de mon travail a ete l'etude des relations structure-fonction au sein de pap i. Des comparaisons de sequence proteique entre pap i et d'autres membres de la famille des enzymes nucleotidyltransferases m'ont amene a identifier les domaines fortement conserves et donc vraisemblablement important pour l'activite enzymatique. La caracterisation fonctionnelle de l'unique membre de la famille detecte chez b. Substilis a etabli que c'est une trna nucleotidyltransferase et non une poly(a) polymerase comme suppose auparavant. Ce resultat suscite de nombreuses interrogations sur la conservation des mecanismes de polyadenylation chez les eubacteries. Par constructions de mutants ponctuels de pap i, j'ai identifie differents acides amines essentiels pour l'activite de l'enzyme. J'ai egalement pu delimiter les regions de pap i impliquees dans les interactions avec les partenaires et avec l'arn.


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Informations

  • Détails : 100 P.
  • Annexes : 154 REF.

Where is this thesis?

  • Bibliothèque : Université Paul Sabatier. Bibliothèque universitaire de sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 1998TOU30186
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