Enzymes de la voie de biosynthese des sterols de plantes : clonages d'alleles sauvages et mutants

par TANIA HUSSELSTEIN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Pierre Marc Benveniste.

Soutenue en 1998

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    Le mutant stel d'arabidopsis thaliana, issu d'une mutagenese ems, se caracterise par l'accumulation de #7-sterols au detriment des #5-sterols accumules majoritairement dans les plantes sauvages. L'expression dans le mutant stel d'une #7-sterol-c5-desaturase sauvage d'arabidopsis thaliana, clonee par complementation fonctionnelle heterologue du mutant erg3 de saccharomyces cerevisiae, a permis de restaurer un phenotype sauvage apportant ainsi la preuve d'une deficience au niveau de l'etape de c5-desaturation chez ce mutant. Nous avons clone l'allele mute de la #7-sterol-c5 desaturase de la plante stel par une reaction de rtpcr a l'aide d'oligonucleotides deduits de la sequence sauvage et ainsi mis en evidence une mutation ponctuelle dans le phase ouverte de lecture de l'enzyme provoquant le remplacement d'une threonine par une isoleucine. Nous avons ensuite caracterise des alleles mutes de la #7-sterol-c5-desaturase, obtenus par mutagenese dirigee ou aleatoire, et ainsi identifie des amino acides indispensables pour une bonne activite catalytique de l'enzyme. Par complementation de fonction de mutants de levures ou par recherche de nouveaux sterols apres transformation de levures sauvages, nous avons egalement caracterise des alleles sauvages codant d'autres enzymes de la voie de biosynthese des phytosterols.


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Informations

  • Détails : 223 P.
  • Annexes : 192 REF.

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