L'adn minicercle pour le transfert de genes : obtention d'adn minicercle par recombinaisons specifiques influence de la taille de l'adn sur l'efficacite de transfection

par PATRICK KREISS

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de JOEL CROUZET.

Soutenue en 1998

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Les plasmides utilises en therapie genique non-virale comportent une origine de replication et un gene dont l'expression confere la resistance a un antibiotique. Il existe donc un risque potentiel de propagation de ces plasmides chez des populations bacteriennes selectionnees pour la presence du gene de resistance. La presente etude relate l'optimisation de la production d'adn minicercle. Les minicercles sont des molecules d'adn surenroulees contenant exclusivement une cassette d'interet therapeutique ainsi que le site de recombinaison attr. Les minicercles sont produits par recombinaison specifique de site, dans une souche de e. Coli lysogene pour le bacteriophage lambda. La recombinaison est catalysee par l'integrase de lambda, au niveau des sites attp et attb presents dans la meme orientation sur un plasmide. La recombinaison permet alors de separer l'origine de replication du plasmide, le gene de resistance aux antibiotiques et toute autre sequence plasmidique indesirable, de la cassette d'interet therapeutique. Les conditions de recombinaison ont ete optimisees, et un rendement de reaction de 90% a pu etre obtenu. Des formes multimeriques de minicercle, egalement produites apres induction de l'expression de l'integrase, ont ete resolues en monomeres avec l'utilisation du systeme de recombinaison specifique de site par/res issu des plasmides rk2. Des etudes de transfert de gene in vitro, dans differents types cellulaires, et in vivo par injection d'adn nu et par electrotransfert, dans le muscle tibial cranial de souris ont ete realisees. Les minicercles ont montre une efficacite de transfert de genes in vitro comme in vivo superieure a celle d'autres plasmides de plus grandes tailles. La caracterisation physico-chimique de lipoplexes composes de lipopolyamine et de plasmides de tailles allant de 0,9 a 52,5 kb, a ete realisee. La petite taille des minicercles permet d'incorporer un plus grand nombre de molecules dans des lipoplexes de taille et de structure identiques pour tous les plasmides testes. Les minicercles constituent un outil interessant pour le transfert de gene.


  • Pas de résumé disponible.

Consulter en bibliothèque

La version de soutenance existe sous forme papier

Informations

  • Détails : 213 P.
  • Annexes : 392 REF.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
Voir dans le Sudoc, catalogue collectif des bibliothèques de l'enseignement supérieur et de la recherche.