La poly(adp-ribose) polymerase relie le reseau de surveillance du genome a l'appareil replicatif

par FRANCOISE DANTZER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Gilbert de Murcia.

Soutenue en 1998

à Strasbourg 1 .

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  • Résumé

    La poly(adp-ribosyl)ation est une reponse de la cellule aux cassures dans l'adn induites par les agents genotoxiques. En se fixant sur les coupures simple-brin de l'adn, et a partir de nad#+ comme substrat, la poly(adp-ribose) polymerase (parp) catalyse la synthese de poly(adp-ribose). Ce polyanion, greffe de maniere covalente et transitoire sur des proteines nucleaires acceptrices (heteromodification) et sur la parp elle-meme (automodification), modifie leur capacite de liaison a l'adn. Afin d'etablir la connexion entre la reponse cellulaire aux dommages et la replication de l'adn, nous avons utilise la technique de l'immunoprecipitation pour identifier l'existence d'une interaction entre la parp et une proteine du complexe de replication dans des cellules en proliferation. Nous avons identifie, in vivo et in vitro, une interaction entre le domaine de liaison a l'adn de la parp et la sous-unite catalytique de l'adn polymerase -primase. L'integrite des doigts a zinc du domaine de liaison a l'adn de la parp est requise pour que l'interaction entre les deux proteines ait lieue. La microscopie confocale revele une colocalisation des deux proteines a la peripherie du noyau. Cette interaction n'est realisee qu'en phase s et g2 du cycle cellulaire mais semble inexistente en g1. En utilisant comme modele d'etude des cellules de souris deficientes en parp, nous montrons : (i) d'une part que la parp controle positivement la replication de l'adn (ii) d'autre part que la parp joue un role de senseur de cassures dans l'adn, crucial pour controler l'avancement de la fourche de replication en presence de dommages. Dans le but de situer le role de la parp dans le reseau de surveillance du genome, nous avons etudie une possible connexion fonctionnelle entre parp et atm dans la reponse cellulaire aux cassures dans l'adn. Nous montrons que l'activite de poly(adp-ribosyl)ation n'est pas affectee dans les cellules at en reponse aux dommages oxydatifs. Par immunoprecipitation, nous avons etabli une interaction physique entre la parp et atm dans des extraits cellulaires. Les croisements de souris parp-/-atm+/- conduisent (i) d'une part a une diminution de la fertilite (ii) et d'autre part a l'absence de descendance parp-/-atm-/- suggerant que la double mutation est embryonique letale. L'ensemble de ces donnees suggere que parp et atm cooperent dans le maintien de l'integrite genomique lors du developpement embryonnaire et en reponse aux dommages oxydatifs. De maniere a clarifier le role de la parp dans la reparation par excision de bases (ber), nous avons mesure l'efficacite de reparation d'un site abasique present sur un adn plasmidique par des extraits cellulaires deficients en parp, en xrcc1, en adn polymerase et doublement deficients en parp et adn polymerase. Notre travail definit un role essentiel de la parp et du complexe parp/xrcc1/adn polymerase dans la voie de reparation par breche longue du ber ce qui oriente sensiblement la parp vers la detection et la reparation des lesions oxydatives dans l'adn.


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Informations

  • Détails : 200 P.
  • Annexes : 353 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Strasbourg. Service commun de la documentation. Bibliothèque Blaise Pascal.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : Th.Strbg.Sc.1998;3014
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