Analyse structure-fonction des recepteurs metabotropiques humains du glutamate

par STEPHANE LITSCHIG

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Anne Feltz.

Soutenue en 1998

à Strasbourg 1 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le but de ce travail etait de localiser le(s) site(s) d'interaction des recepteurs mglur1 et r5 humains du glutamate avec deux antagonistes de nouvelle structure specifiques pour les mglurs de la classe i, cpccoet et mpvb. Des recepteurs modifies genetiquement ont ete generes en utilisant la methode de reaction de polymerisation en chaine de l'adn. Apres clonage et sequencage les recepteurs mutants ont ete transfectes transitoirement dans des cellules mammaliennes hek 293 et/ou cos 1 puis testes en employant un essai consistant a suivre les changements de concentration intracellulaire en ions calcium afin de verifier leur fonctionalite. Cpccoet supprime les reponses calciques induites par le glutamate dans des cellules exprimant le recepteur mglur1b humain avec une concentration inhibant 50% de la reponse fonctionnelle (cl#5#0) d'environ 10 m. Par contre, mpvb, un representant d'une autre classe de composes, inhibe specifiquement le recepteur mglur5a humain avec une cl#5#0 d'environ 0,5 m. L'analyse d'une serie de recepteurs chimeriques a revele que les composes interagissaient avec les regions transmembranaires et/ou la partie carboxy-terminale du recepteur et non avec le vaste domaine extracellulaire amino-terminal suppose contenir le site de fixation du glutamate, contrairement aux antagonistes competitifs et selectifs connus pour la classe i et iii. Des etudes de mutagenese dirigee ont montre que cpccoet interagissait specifiquement avec thr815 et ala818, deux acides amines localises a la surface du recepteur entre la boucle extracellulaire 3 et la septieme region transmembranaire (tmd7). L'introduction dans mglur1 des deux amino-acides correspondant de mglur5, met802 et ser805, a pour effet la perte de l'inhibition par cpccoet. Contrairement a cpccoet, mpvb semble interagir avec tmd7 ainsi qu'avec des residus situes dans tmd2 et 3 du recepteur mglur5 humain. Comme cpccoet et mpvb interagissent avec un nouveau site different du site de fixation du glutamate, on peut supposer qu'ils agissent de maniere non competitive. Ceci a ete verifie par un essai d'hydrolyse des phosphoinositides. L'analyse des courbes dose-reponses de glutamate en presence de differentes concentrations en antagonistes a montre que les deux composes diminuent la reponse maximale du glutamate sans changer les valeurs de ce#5#0, ni le coefficient de hill. Cette etude est la premiere demonstration a notre connaissance d'antagonistes non competitifs efficaces et selectifs des mglurs de la classe i.

  • Titre traduit

    Structure-function analysis of human metabotropic glutamate receptors


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  • Détails : 178 P.
  • Annexes : 181 REF.

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