Mise en oeuvre de la détection fluorimétrique indirecte induite par laser en électrophorèse capillaire. Application à l'électrophorèse de zone et à la chromatographie électrocinétique micellaire

par Christophe Morin

Thèse de doctorat en Chimie

Sous la direction de Paul-Louis Desbène.

Soutenue en 1998

à Rouen .


  • Résumé

    Ces travaux portent sur la mise en oeuvre de la détection fluorimétrique indirecte induite par laser en électrophorèse capillaire en utilisant un détecteur commercial sans en modifier les caractéristiques techniques ainsi que le sel de sodium de la fluorescéine comme agent de visualisation. Après quelques rappels sur les principes de la détection indirecte avec, en préambule, une brève présentation des deux techniques utilisées dans ce travail, à savoir l'électrophorèse capillaire de zone libre (CZE) et la chromatographie électrocinétique micellaire (MEKC), nous avons tout d'abord développé le traitement théorique de la détection fluorimétrique indirecte. Celui-ci nous a permis de considérer, en CZE, l'analyse de solutés présentant ou non une charge de même signe que l'anion fluorescéinate, à savoir, à titre d'exemple, celle, d'une part, des anions organiques (alcanesulfonates et acides carboxyliques possédant jusqu'à 18 carbones) et des anions inorganiques, et d'autre part des cations inorganiques. L'analyse de divers solutés neutres en MEKC s'est aussi avérée possible puisque la fluorescence émise par la fluorescéine est différente en pseudo-phase micellaire qu'en phase aqueuse. Notre approche analytique visant à concilier résolution et sensibilité de détection, il a été nécessaire d'étudier l'impact, sur ces deux grandeurs fondamentales, de la concentration en fluorescéine dans l'électrolyte de séparation, de la force ionique, du pH ainsi que de l'ajout, dans cet électrolyte, de cosolvant organique ou encore de tensioactifs anioniques, cationiques voire neutres. La sensibilité obtenue (seuils de détection généralement de l'ordre de quelques dizaines de ppb) ainsi que l'aspect quantitatif et qualitatif s'avèrent des plus satisfaisants et ouvrent des perspectives intéressantes si l'on considère l'accès à une détection à la fois sensible et universelle tout en tirant profit de la très haute performance de l'électrophorèse capillaire.


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  • Cote : 98/ROUE/S011
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