Caracterisation fonctionnelle, apres expression heterologue dans les cellules sf9, d'akt1, un canal clone chez arabidopsis thaliana implique dans l'absorption de k#+ par la racine

par CHRISTELE HOREAU

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Jean-Baptiste Thibaud.

Soutenue en 1998

à Paris 11 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Le canal vegetal akt1 est exprime dans le systeme baculovirus/cellules sf9 pour realiser sa caracterisation fonctionnelle par la technique du patch-clamp. En configuration cellule entiere, sur des cellules exprimant le canal akt1, un courant entrant se developpe lentement en reponse a une hyperpolarisation. L'activation d'akt1 est principalement regulee par le potentiel de membrane (charge equivalente de gating 2,2 et potentiel de demi activation -82 mv) mais depend egalement des nucleotides (atp et gmpc). Les rapports de permeabilite (deduits des potentiels d'inversion) et de conductance revelent une forte selectivite en faveur de k#+ vis a vis d'autres cations monovalents (na#+, li#+, rb#+ et nh#4#+). Un phenomene de saturation lorsque k#+ externe augmente, ainsi qu'une competition entre rb#+ et k#+ dans le pore du canal, suggerent la presence simultanee de plusieurs ions dans le pore. Le cs#+ externe, inhibiteur teste le plus efficace sur akt1, bloque le canal de facon voltage et concentration dependante. Par contre, le blocage par le tea est independant du potentiel. Le ph externe (entre 4 et 9) dans k#+ 100 mm n'a pas d'effet sur l'activite du canal. Les enregistrements sur canal unique, obtenus en configuration cellule attachee (k#+ 150 mm), revelent un niveau principal de conductance de 9 ps environ et un niveau de conductance, moins frequent, d'environ 6 ps. La first latency presente la meme dependance par rapport au potentiel que le temps de demi-activation du courant macroscopique. Aux potentiels les plus negatifs, le temps moyen d'ouverture diminue ainsi que la probabilite de l'etat ouvert, et l'activite du canal s'organise en bursts. L'analyse de ces donnees et des temps moyens de fermeture et d'ouverture conduit a proposer pour akt1 un modele cinetique comportant au moins un etat ferme qui ne peut etre atteint qu'apres une ouverture.


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  • Détails : 174 P.
  • Annexes : 209 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
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  • Cote : TH2014-014063
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