Conception et preparation de nouveaux outils chimiques pour la biologie structurale

par FABRICE BALAVOINE

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Charles Mioskowski.

Soutenue en 1998

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Au cours de ce travail, nous avons developpe quatre outils chimiques constitues d'un complexe fonctionnel n-nitrilotriacetate du nickel (ii) (ni-nta), dans le but d'etudier les structures tridimensionnelles de proteines etiquetees-histidine. Nous avons prepare un reactif de photopontage radiomarque afin de reveler des interactions proteine-proteine stables au sein d'un complexe multimerique et d'apporter des informations sur les structures quaternaires de ces macromolecules biologiques. L'efficacite et la selectivite de ce reactif vis-a-vis des etiquettes-histidine ont ete demontrees grace a des etudes de chromatographie de permeation de gel (cpg) menees sur la sous-unite abc23 des arn polymerases de saccharomyces cerevisiae. Nous avons prepare un lipide pour la cristallisation 2d de proteines etiquetees-histidine solubles. Ce lipide, denomme ni-nta-doga, possede toutes les proprietes physico-chimiques requises pour cette technique et nous a permis de cristalliser trois proteines etiquetees-histidines (la proteine hupr-his#6, l'arn pol. I ac40-his#6 et l'arn pol. I abc23-his#6). Dans le but d'induire une cristallisation helicoidale des proteines etiquetees-histidine, nous avons concu et prepare des polymeres poly-(p-phenyleneethynylene) fonctionnalises par des complexes ni-nta. Grace a des experiences de cpg menees sur plusieurs proteines, nous avons prouve que la fixation de macromolecules etiquetees-histidine sur un polymere appele ni-nta-ppe est efficace et induite par l'interaction entre le complexe du nickel (ii) et les histidines de l'etiquette des proteines. Enfin, nous avons concu et prepare des reactifs hetero-bifonctionnels susceptibles de se fixer sur les surfaces exterieures des nanotubes de carbone et d'induire une cristallisation helicoidale de proteines autour des tubes. Nous avons montre que l'adsorption physique des reactifs sur la surface des nanotubes de carbone multi-feuillets est efficace. Nous avons observe que les molecules de sds, le lipide biotinyle biotin-dhpe et le lipide ni-nta-doga forment autour des nanotubes de carbone des systemes auto-organises de symetrie helicoidale. Nous avons egalement rapporte la formation spontanee de cristaux helicoidaux de streptavidine et de proteine hupr-his#6 a la surface de nanotubes de carbone multi-feuillets.


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  • Détails : 365 P.
  • Annexes : 287 REF.

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  • Bibliothèque : Université Paris-Sud (Orsay, Essonne). Service Commun de la Documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-013972
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