Etude de la specificite de l'endoribonuclease regb du bacteriophage t4 : influence de la sequence et de la structure de l'arn : role de la proteine ribosomique s1

par ROUH-MEI HU

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Marc Uzan.

Soutenue en 1998

à Paris 11 .

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  • Résumé

    L'endoribonuclease regb du bacteriophage t4 coupe au milieu des motifs ggag des arnm. Regb purifiee est tres peu active in vitro. Son activite est stimulee environ 100 fois par la proteine ribosomique s1. In vivo, s1 est responsable de l'inactivation fonctionnelle et chimique des arnm precoces de t4 et egalement de la maturation des longs arnm precoces de t4. In vivo, tous les motifs ggag ne sont pas coupes par regb. Dans cette these, je montre que la sensibilite et la resistance a regb observees apres une infection par t4 peuvent etre reproduites in vivo dans les cellules d'e. Coli non-infectees et in vitro. Cela suggere que les motifs ggag resistants a regb apres l'infection ne sont pas des substrats, quelque soit la periode au cours du cycle ou les arnm sont faits. In vitro, a hautes concentrations, regb seule est capable de couper specifiquement les motifs ggag. L'efficacite de clivage est deja meilleure pour un bon substrat que pour un mauvais substrat. Regb possede donc l'activite enzymatique et discriminatoire. S1 stimule l'activite de regb avec les deux types d'arnm du meme ordre de grandeur. Un mauvais substrat peut etre bien coupe par regb en presence de hautes concentrations de s1, cependant, a une concentration de regb donnee, l'efficacite de coupure par regb dans les mauvais substrats atteint un plateau plus bas que pour les bons substrats. L'analyse des structures secondaires de ces deux types d'arn par sondes chmiques montre que les mauvais substrats ont des structures plus complexes autour du motif ggag que les bons substrats. Regb serait inhibee par ces structures. Dans un petit arn de 30 nucleotides, l'efficacite de coupure par regb dans un motif ggag situe dans une region simple brin est meilleure que celle localisee dans un motif structure (structure predite par calcul). En plus, s1 n'est pas necessaire pour la coupure dans ce motif ggag libre. S1 serait un arn chaperon, modifiant la structure du motif ggag de maniere a ce qu'il soit coupe.


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  • Détails : 264 P.
  • Annexes : 437 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-013938
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