La sequestration de l'origine de replication et le controle negatif de l'initiation de replication de l'adn chez escherichiacoli. Son implication dans la coordination des evenements du cycle cellulaire

par ABDELKADER BAHLOUL

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MASAMICHI KOHIYAMA.

Soutenue en 1998

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Les travaux presentes dans ce memoire sont consacres a l'analyse et l'exploration du processus de sequestration membranaire de l'adn d'oric quand celui-ci est hemimethyle, en tant que controle negatif de l'initiation de replication, afin qu'elle n'ait lieu qu'une fois par cycle cellulaire et par origine, chez l'enterobacterie escherichiacoli. L'essentiel de ce travail concerne la caracterisation des proteines presumees etre impliquees dans la sequestration, seqa et hobh (connue maintenant sous le nom de napa-apha) ainsi que l'hemimethylation de l'adn substrat que constitue l'origine de replication oric. Seqa est-elle la seule proteine qui assume le role determinant en dirigeant la sequestration membranaire d'oric ? nous avons caracterise la fonction et les proprietes de la membrane du mutant seqa- : nos resultats indiquent que seqa n'assume pas la fonction de sequestration seule, et qu'elle n'est, vraisemblablement, pas indispensable in vivo a ce processus de regulation negative de l'initiation. L'intervention de seqa pourrait n'etre qu'indirecte via la reconnaissance de l'etat hemimethyle de l'adn. Il apparait clairement que d'autres facteurs sont donc necessaires pour expliquer la sequestration normale, in vivo, chez les cellules alignees en absence de seqa. Un processus thermodependant est implique dans la persistance de la sequestration chez les cellules dnac2ts synchronisees ; il peut etre revelateur de l'existence d'autres mecanismes conduisant a la sequestration puis a la desequestration ulterieure. L'implication de ce processus est valable aussi bien chez la souche parentale dnac2ts que chez le mutant seqa derive. Existe-t-il au cours du cycle cellulaire une coordination entre les deux processus de sequestration et de segregation des chromosomes-fils chez e. Coli ? dans le contexte de la theorie du replicon, nous avons essaye de repondre a cette question en utilisant le choc hyperosmotique qui perturbe l'interaction des membranes entre elles et celle de l'adn avec la membrane, en creant des baies de plasmolyse qui affectent les zones d'adhesion entre membranes interne et externe. Contrairement aux parents sauvages respectifs, les mutants dam-, seqa et hobh manifestent des anomalies de segregation des chromosomes fils et de division cellulaire a la suite du choc osmotique. Comme par ailleurs, il est connu qu'oric se positionne a differents sites dans la cellule au cours du cycle cellulaire, nous proposons que le seul lien entre la sequestration et les defauts observes chez les mutants analyses repose sur la participation de l'adn de la region d'oric dans les differentes phases du cycle. Une possible correlation entre la methylation par dam methyletransferase et la topologie de l'adn via l'adn gyrase ainsi qu'avec l'expression des proteines de membrane externe est rapportee.


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  • Détails : 217 P.
  • Annexes : 635 REF.

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  • Cote : TH2014-013752
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