Mise en oeuvre de la technique de mrna differential display pour identifier des genes de reponse precoce a l'auxine

par CAMILLE ROUX

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Catherine Perrot-Rechenmann.

Soutenue en 1998

à Paris 11 .

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  • Résumé

    Des marqueurs precoces de reponse a l'auxine chez nicotiana tabacum ont ete recherches par une approche de mrna differential display. Le differentiel choisi pour cette etude a ete de traiter ou pas des plantules etiolees avec 1 m d'ana pendant 30 minutes. L'adaptation et la mise au point du mrna differential display nous ont conduits a developper un nouveau protocole d'amplification permettant d'obtenir des profils d'amplification reproductibles et exploitables. 120 combinaisons d'amorces ont ete testees, conduisant a l'identification de bandes differentiellement amplifiees, 28 bandes dans les plantules traitees et 13 bandes dans les plantules non traitees. L'analyse approfondie de 4 fragments pcr amplifies preferentiellement dans les plantules traitees par l'auxine a ete entreprise. Le criblage d'une banque d'adnc de plantules a permis d'obtenir les adnc correspondants. L'adnc nt-thp1 presente des homologies avec les proteases a cysteine. Les adnc nt-gh3, nt-saurc, nt-iaa2. 3 et nt-iaa2. 5 presentent des homologies avec des genes soumis a regulation pour l'auxine appartenant aux familles gh3, saur et iaa/aux. La caracterisation de ces adnc a ete realisee par analyse en northern blot en etudiant essentiellement leur reponse a l'auxine. Les cinetiques et les dose-reponses realisees en presence d'ana, ainsi que les etudes de specificite, demontrent que nt-gh3, nt-saurc et nt-iaa2. 3 repondent rapidement, specifiquement et a des doses faibles d'auxine. L'approche developpee nous a donc permis d'isoler de nouveaux marqueurs precoces de reponse a l'auxine chez le tabac.


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  • Détails : 172 P.
  • Annexes : 266 REF.

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  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TH2014-013637
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