Voltametrique cyclique et catalyse enzymatique construction d'un electrode a glucose oxydase et hexokinase immobilisees par reconnaissance avidine-biotine. Analyse de son fonctionnement

par NATHALIE ANICET

Thèse de doctorat en Chimie

Sous la direction de Jacques Moiroux.

Soutenue en 1998

à Paris 7 .

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  • Résumé

    Les resultats presentes dans ce manuscrit s'inscrivent dans le cadre d'un theme de recherche concernant l'application de la voltametre cyclique a l'analyse de reactions catalysees par les enzymes. Ceci a permis d'approfondir la connaissance du mecanisme d'oxydation du d-glucose par la glucose oxydase avec pour mediateur des derives de ferrocene. Premierement, nous avons montre que la glucose oxydase demeure un catalyseur efficace meme dans un milieu de viscosite proche de celle de melanges de sucres industriels. Deuxiemement, lorsqu'une chiralite est introduite sur un substituant lateral du ferrocene, elle n'affecte pas la vitesse de la reaction de ce mediateur avec la glucose oxydase. Un edifice constitue de monocouches moleculaires successives de glucose oxydase biotinylee et d'avidine a ete construit a la surface d'une electrode de carbone vitreux. Nous avons synthetise l'enzyme biotinylee. Un protocole optimal d'immobilisation a ete elabore. Il apparait que si la compacite des constructions utilisant les interactions avidine-biotine est identique a celle trouvee dans le cas des constructions utilisant les interactions antigene-anticorps, la concentration superficielle en enzyme active dans une monocouche est nettement inferieure a celle trouvee avec les interactions antigene-anticorps. Toujours en utilisant l'assemblage avidine-biotine, nous avons reussi a greffer un systeme catalytique a enzyme et mediateur attaches a la surface de l'electrode. L'analyse quantitative de ce systeme montre que la mobilite du ferrocene lie controle la cinetique du processus catalytique. Enfin, nous avons immobilise un systeme bi-enzymatique en multimonocouches a la surface d'une electrode. La competition vis a vis du glucose des deux enzymes, la glucose oxydase et l'hexokinase en presence d'atp a ete mise en evidence. Nous avons synthetise l'hexokinase biotinylee. Nous sommes en mesure de maitriser et de prevoir la reponse en courant d'un tel systeme bi-enzymatique.


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Informations

  • Détails : 150 p.
  • Annexes : 72 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1998
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