La nucleoside diphosphate kinase des proprietes regulatrices pour une enzyme du metabolisme ? contribution a l'etude de la ndp kinase de dictyostelium discoideum

par OLIVIER SELLAM

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de MICHEL VERON.

Soutenue en 1998

à Paris 7 .

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  • Résumé

    La nucleoside diphosphate kinase (ndp kinase) est une enzyme du metabolisme qui catalyse la synthese des ribo- et desoxyribo-nucleosides triphosphates a partir de leurs precurseurs diphosphates selon un mecanisme de type ping-pong. C'est un hexamere de sous-unites identiques de 17 kda dont la structure tridimensionnelle est connue. L'implication de ndp kinases dans le developpement et la metastase a ete mise en evidence respectivement chez l'homme et la drosophile. Par ailleurs, il a ete recemment montre que la ndp kinase humaine est capable de se fixer sur le promoteur de l'oncogene c-myc et d'en stimuler la transcription. J'ai etudie plusieurs mutants de la ndp kinase de dictyostelium. L'etude du mutant h55a a montre le role crucial l'his 55 dans les proprietes de fluorescence de l'enzyme phosphorylee, et sa contribution faible dans la catalyse. Le mutant n119a a permis d'obtenir des co-cristaux de l'enzyme avec l'azt diphosphate. La structure obtenue permet d'expliquer la faible efficacite de phosphorylation de l'azt diphosphate in vivo. J'ai par ailleurs etudie la proteine mutante s124g de dictyostelium, correspondant a un mutant isole dans des lignees humaines de neuroblastomes. La mutation n'affecte pas la catalyse, mais modifie les proprietes de repliement du polypeptide. Les fonctions biologiques de la ndp kinase chez dictyostelium ont ete etudiees par surexpression des formes sauvage et mutantes du gene codant pour la ndp kinase cytosolique. J'ai egalement realise l'inactivation de ce gene par recombinaison homologue, et obtenu des transfectants viables. Dans tous les cas, aucune difference de phenotype avec la souche parentale n'a ete observee. Cette absence d'effet chez dictyostelium est discutee dans le contexte des observations realisees chez d'autres organismes.


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Informations

  • Détails : 155 P.
  • Annexes : 160 REF.

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  • Bibliothèque : Université Paris Diderot - Paris 7. Service commun de la documentation. Bibliothèque Universitaire des Grands Moulins.
  • Accessible pour le PEB
  • Cote : TS1998
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