Mise au point d'un outil de genetique inverse pour les lyssavirus

par PHILIPPE LE MERCIER

Thèse de doctorat en Sciences biologiques fondamentales et appliquées

Sous la direction de Daniel Blangy.

Soutenue en 1998

à Paris 6 .

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  • Résumé

    Les lyssavirus (rage et virus apparentes) sont des virus a arn negatif dont le genome est flanque de deux sequences precises (le leader et le trailer) qui sont indispensables a sa replication et a sa transcription. L'encapsidation du genome par la nucleoproteine (n) avec le complexe de replication/transcription viral constitue par la phosphoproteine (p) et la polymerase (l) est suffisante pour amorcer le cycle du virus. Dans le cadre d'un travail visant a creer un outil de genetique inverse pour lyssavirus, nous avons construit un vecteur permettant d'exprimer un minigenome rabique. Ce minigenome est compose d'un arn messager negatif de luciferase flanquee par le leader et le trailer du virus de la rage. L'extremite 3 precise du leader est obtenue par coupure de l'arn par le ribozyme de l'hepatite delta (arn auto catalytique), dont la sequence a ete clonee en aval de ce minigenome. Ce minigenome a ete exprime dans le cytoplasme de cellules de mammifere par l'intermediaire de l'arn polymerase de t7. La co-expression des proteines virales n, p et l a permis de trans-complementer le minigenome. Ce dernier a ete transcrit, donnant lieu a une expression specifique de luciferase, replique et a bourgeonne sous forme de virion pouvant infecter d'autre cellules. L'importance de l'extremite 5 de l'arn minigenomique a ete montree en ameliorant l'efficacite de la transcomplementation lorsqu'un ribozyme tete de marteau clivant l'arn en 5 a ete insere dans le vecteur d'expression. Un vecteur cassette lyssavirus a ete cree en introduisant des sites de restriction dans les ribozymes. Il permet de sous-cloner rapidement des sequences virales dans le vecteur d'expression, ce qui facilitera l'etude future des lyssavirus par genetique inverse. La complementation de minigenome rabique par virus assistant rage, mokola ou ebl-1 (lyssavirus tres divergeants du virus de la rage) a permis de montrer que les proteines du virus mokola sont capables de reconnaitre les sequences leader et trailer du virus de la rage, mais pas celles du virus ebl-1. Un outil de genetique inverse valable pour tous les lyssavirus a ainsi ete cree, il ouvre de nombreuses perspectives en particulier pour l'etude fonctionnelle de proteines virales mutantes, l'etude des sequences cis-regulatrices et a terme l'obtention de lyssavirus infectieux a partir de cadn.

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Informations

  • Détails : 208 p.
  • Annexes : 128 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1998
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