Caracterisation des lymphocytes cd8 f o r tcd57+, analyse biochimique de la glycoproteine inhibitrice des fonctions de cytotoxicite qu'ils produisent

• Auteur / Autrice : Lucile Mollet
• Direction : Brigitte Autran
• Type : Thèse de doctorat
• Discipline(s) : Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie
• Date : Soutenance en 1998
• Etablissement(s) : Paris 6

Résumé

Ce travail porte sur l'etude phenotypique et fonctionnelle des lymphocytes t cd8+ portant le marqueur cd57 et produisant spontanement une molecule appelee icf (inhibitor of cytotoxic functions), inhibant la lyse specifique et non specifique d'ag. Caracterisation des lymphocytes cd8+ cd57+ : ils ont un phenotype de lymphocytes t active (cd45ra+, cd38+ et hla-dr+, expression particuliere de certaines molecules d'adhesion, granules riches en perforine et granzymes). Il est possible d'amplifier la population cd8+cd57+ apres stimulation lors de culture a long terme, les lymphocytes cd8+cd57+ obtenus sont enrichis en cellules specifiques d'antigene. Fonctionnellement, ce sont des lymphocytes t cd8+ cytotoxiques (ctl) prets a tuer mais ayant perdu toute capacite proliferative. Les lymphocytes clonaux cd8+cd57+, amplifies pendant la leucemie a gros lymphocytes t granuleux, ont un phenotype legerement different mais possedent les memes caracteristiques fonctionnelles y compris celle de produire un facteur inhibiteur de la phase effectrice de la lyse, similaire a l'icf. Les ctl cd8+cd57+ sont capables de lyser et d'inhiber la phase effectrice de la lyse ; et cette dualite fonctionnelle semble regulee par le niveau d'engagement de leur complexe cd3 (pas d'inhibition si la reticulation du complexe est forte). Mecanisme d'action de l'icf sur la phase effectrice de la lyse : il agit de facon transitoire sur l'effecteur cytotoxique dans lequel il induit une augmentation d'ampc. L'effet inhibiteur de l'icf et la production d'ampc, sont leves par l'il-4 et l'ifn-. Toute investigation supplementaire du mode d'action de l'icf implique la purification de cette molecule. Purification de cette glycoproteine par iso-electrofocalisation sur gradient de ph immobilise : c'est une proteine de 30 kda fortement glycosylee, dont les n-glycosylations sont de type riche en mannose. L'icf a ete elue et localise sur gel 2d colore a l'argent dans la zone de phi7, 13-7,55. Les lymphocytes cd8+cd57 ont donc atteint un etat de differenciation tardif en effecteur cytotoxique, caracterise par une incapacite a proliferer. Un sequencage proteique de l'icf qu'ils produisent est possible, mais impliquera l'etablissement de lignees cellulaires productrices cd8+cd57+.