Solubilisation et reconstitution de membranes biologiques artificielles et naturelles : - etude d'une sonde fluorescente membranaire, le laurdan, et application a la transition vesicule-micelle. - controle de la solubilisation et de la reconstitution de la proteine g du virus de la stomatite vesiculaire

par MATHIAS VIARD

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Maïté Paternostre.

Soutenue en 1998

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Les preoccupations de l'equipe dans laquelle j'ai effectue ma these s'inscrivent dans le theme general de la transition vesicule-micelle et de la modelisation de membranes biologiques naturelles. Les mecanismes de la transition vesicule-micelle de systemes phospholipide-amphiphile sont intimement relies aux mecanismes de reconstitution des proteines membranaires dans des membranes artificielles lorsque des protocoles utilisant des detergents sont utilises. Le travail de these se separe ainsi en deux parties. L'une porte sur l'etude approfondie d'une sonde fluorescente membranaire, le laurdan, extremement sensible a la transition vesicule-micelle et l'autre sur la solubilisation d'un virus, la reconstitution de son enveloppe et l'incorporation dans des liposomes de l'unique proteine intrinseque de l'enveloppe de ce virus. Au cours de cette seconde partie, le laurdan a ete utilise pour suivre la solubilisation du virus. La premiere partie de mon travail avait pour objet d'obtenir de nouvelles informations concernant la transition vesicule-micelle. Dans un premier temps, nous avons realise une etude fondamentale du comportement du laurdan dilue dans differents solvants. Cette etude nous a permis de determiner les parametres auxquels la sonde etait sensible et de proposer un schema reactionnel pour la desexcitation du laurdan. Dans un second temps, le laurdan a ete insere dans des agregats d'amphiphiles rencontres lors de la transition vesicule-micelle pour obtenir des informations supplementaires sur cette transition. La seconde partie de mon travail a porte sur la reconstitution de l'activite fusogene liee a la proteine g de l'enveloppe du virus de la stomatite vesiculaire. La litterature a montre que les reconstitutions de l'enveloppe virale apres solubilisation par l'octylglucoside (og) n'aboutissaient qu'a des systemes dont l'activite fusogenique differait de celle du virus natif. Nous avons montre que le controle de la solubilisation des virus par l'og conduisait, apres elimination du detergent, a des virosomes dont l'activite fusogene est similaire a celle des virus intacts. Nous avons ensuite reconstitue cette proteine purifiee dans des liposomes preformes destabilises par l'og. Les proteoliposomes obtenus presentent une activite fusogene comparable a celle du virus intact.


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Informations

  • Détails : 142 p.
  • Annexes : 375 ref.

Où se trouve cette thèse ?

  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Consultable sur place dans l'établissement demandeur
  • Cote : T Paris 6 1998 358
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1998
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