Creation d'un modele murin associant l'inaction des genes h-2 de classe i et l'expression d'une molecule hla de classe i monocatenaire pour l'etude des reponses cytotoxiques restreintes par hla-a*0201

par STEVE PASCOLO

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de FRANCOIS LEMONNIER.

Soutenue en 1998

à Paris 6 .

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Résumé

En raison de la dominance des reponses cytotoxiques restreintes par les molecules h-2 de classe i chez les souris transgeniques exprimant des molecules hla de classe i, nous avons developpe un nouveau modele murin des reponses cytotoxiques restreintes par hla-a*0201 ou l'antigene humain est la seule molecule d'histocompatibilite de classe i exprimee. A cette fin nous avons teste, in vitro, les capacites fonctionnelles de molecules hla-a*0201 monocatenaires ou la 2-microglobuline (2-m) et la chaine lourde sont associees de facon covalente par un lien de quinze acides amines. Trois antigenes monocatenaires ont ete crees : hhh totalement humain, hhd et mhd homologues a hhh mais possedant les domaines 3, transmembranaires et cytoplasmiques de h-2 d b, mhd se distinguant de hhd par la presence de la 2-microglobuline murine a la place de la sous-unite humaine. Chacune de ces molecules est structurellement et fonctionnellement homologue a son equivalent heterodimerique. La molecule hhd s'exprimant plus abondamment et interagissant plus efficacement avec les molecules cd8 murines a ete, pour ces deux raisons, utilisee pour la transgenese. Les souris transgeniques obtenues ont ete secondairement rendues deficientes pour les molecules h-2 de classe i par croisement avec des souris dont les genes h-2 d b et 2-microglobuline avaient ete invalides. Les souris hhd + / +, 2-m - / -, h-2 d b - / - possedent un repertoire de lymphocytes t cd8 + partiellement reconstitue (0,4% de lymphocytes t cd8 + pour les rates de souris h-2 d b - / -, 2m - / - ; 5% pour les souris hhd + / +, h-2 d b - / -, 2-m - / -) et paraissant normalement diversifie en terme de v. Leurs reponses cytotoxiques antivirales sont aisement detectables, uniquement controlees par la molecule hla-a*0201 monocatenaire et, dans le cas du virus influenza, dirigees essentiellement contre le peptide immunodominant chez les patients hla-a*0201 +.

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