Mecanisme moleculaire de la recombinaison homologue : analyse structurale et thermodynamique des complexes reca-adn et rad51-adn

par FABRICE MARABOEUF

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Paul Vigny et de MASAYUKI TAKAHASHI.

Soutenue en 1998

à Paris 6 .

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  • Résumé

    La recombinaison homologue consiste en l'echange de brins d'adn entre des regions d'adn homologues. In vitro, la proteine reca d'e. Coli permet la recherche d'homologie, l'echange des brins d'adn et la formation d'un adn heteroduplex. Reca polymerise sur l'adn simple-brin et forme un filament dans lequel l'adn est etire de 50% de sa longueur. Des proteines similaires a reca en sequence et fonction ont ete trouvees chez les eucaryotes (proteines de la famille rad51) : rad51 forme avec l'adn des filaments nucleoproteiques similaires aux filaments reca-adn. Le cofacteur atp est necessaire a la reaction d'echange des brins. Dans cette these, je me suis interesse a la structure des complexes reca-adn et rad51-adn, intermediaires moleculaires de la reaction d'echange de brins. Par fluorescence, j'ai identifie les sites d'interaction de reca avec l'adn (la boucle l2 est proche des 1er et 2eme sites de fixation a l'adn), et montre que le site de liaison du cofacteur atp sur reca est tres proche de celui du 1er adn. J'ai determine en dichroisme lineaire que les bases du 1er et 2eme adn dans le complexe synaptique sont presque coplanaires, orientation favorable a l'appariement des bases lors de la recombinaison. Puis, j'ai etudie la cinetique d'association reca-adn par mesure d'anisotropie de fluorescence. Reca s'associe plus facilement aux adn dont les bases sont moins empilees. J'ai ensuite determine l'enthalpie de cette association par titration en microcalorimetrie (itc). L'association du 2eme brin d'adn est favorisee enthalpiquement quand il est complementaire au 1er brin. Enfin, j'ai observe une grande similitude structurale et thermodynamique entre l'interaction de rad51 avec l'adn et celle de reca. Dans le complexe rad51-atp-adn, les bases d'adn sont desempilees et leur mouvement est reduit. J'ai trouve une difference entre les complexes rad51-adn et reca-adn concernant l'effet de l'adp sur la structure du filament.


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Informations

  • Détails : 254 p.
  • Annexes : 266 ref.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1998
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