Les formes de proteines kinases c dans le tubule proximal de rein de rat : - caracterisation immunologique et pharmacologique dans la cellule entiere et dans une fraction enrichie en bordures en brosse. effet de l'angiotensine ii. - leur role dans la regulation des echangeurs na +/h + luminaux par l'angiotensine ii

par ZOUBIDA KARIM JIMENEZ

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de Josiane Poggioli.

Soutenue en 1998

à Paris 6 .

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  • Résumé

    L'echangeur na +/h + (nhe) est un transporteur localise surtout dans la membrane plasmique. Il couple l'echange d'un ion na+ contre un proton excrete normalement a l'exterieur de la cellule. Dans le tubule proximal de rein, l'activite nhe apicale est responsable d'environ 2/3 de l'absorption de nahco 3 et de la totalite du transport transepithelial de nacl. Cette activite nhe est sous le controle de diverses regulations hormonales. L'objectif de notre travail etait d'etudier la regulation des echangeurs nhes par les processus impliquant les proteines kinases c (pkcs). Nous avons d'abord identifie les formes de la pkc presentes dans une suspension de tubules corticaux fraichement isoles de rein de rat. Les esters de phorbol (pma), le ca + + et la phospholipase d (pld) ont ete utilises pour caracteriser les differentes pkcs, et l'angiotensine ii (aii) a ete utilisee comme activateur physiologique. Parmi les 4 pkcs presentes dans la suspension tubulaire, (, , et ) seule la presence des pkcs et est augmentee dans la fraction particulaire sous l'effet de l'aii (10 - 7m). Ceci est associe a une translocation de l'activite pkc depuis la fraction soluble vers la fraction particulaire (karim et coll. , am. J. Physiol. , 269, c134-c140, 1995). Notre interet s'est ensuite porte sur la membrane apicale, compartiment qui contient une ou plusieurs formes d'echangeurs nhes. Son isolement a ete realise par la methode de precipitation au mg + +. Dans le compartiment apical, les pkcs , , et ont ete detectees ainsi que la presence de nhe2 et de nhe3 (karim et coll, j. Am. Soc. Nephrol. , 7 n o9, 1256, 1996). L'activite na +/h + a ete determinee par la vitesse initiale de capture de 2 2na initiee par un gradient sortant de h +. Nous avons considere que l'activite sensible a 100m des composes hoechst (hoe694 ou 642) represente celle de nhe2 et que l'activite sensible a 100m ethylisopropylamiloride (eipa) represente celle de nhe2 et nhe3. Dans nos conditions experimentales, l'activite d'echange est principalement representee par celle de nhe3. Le pretraitement de la suspension de tubules corticaux avec le pma (10 - 7m, 4min. ) augmente la presence des pkc , et dans les membranes luminales, augmente l'activite na +/h + sensible au hoe694 correspondant a nhe2 et ne modifie pas l'activite de nhe3 estimee par la difference entre l'activite resistante au hoe et celle resistante a l'eipa. Le pretraitement avec la pld (1u/ml, 10 min) augmente la presence de la pkc et inhibe l'activite nhe3. Cet effet est aboli lorsque les tubules sont pretraites par 10 - 5m bisindolylmaleimide (inhibiteur specifique des pkcs). Nous avons des arguments en faveur de l'implication des filaments d'actine ou de proteines associees dans la regulation de nhe2 et de nhe3. L'aii a un effet biphasique sur l'activite na +/h + des membranes luminales. 10 - 1 1m (4 min) entraine la translocation de la forme atypique de pkc (insensible au pma et a la pld) et une augmentation de l'activite de nhe2 et de nhe3. Cet effet sur les echangeurs est inhibe par 10 - 5m bisindolylmaleimide. 10 - 1 0m aii (4 min) augmente l'abondance des pkcs et , ne modifie pas l'activite na +/h +. Enfin 10 - 7m aii (4 min), augmente l'abondance des pkcs , , et et diminue l'activite de nhe3 (karim et coll. , j. Am. Soc. Nephrol. , 8, 28a, 1997). Nous suggerons que les pkcs , , ou peuvent etre impliquees dans l'activation de nhe2, la pkc dans celle de nhe3. La pkc pourrait participer a l'inhibition de nhe3.


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  • Détails : 138 p.
  • Annexes : 199 ref.

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