Activite metabolique et aptitude a la congelation de l'embryon bovin produit in vitro

par CATHERINE GUYADER JOLY

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de René Ozon.

Soutenue en 1998

à Paris 6 .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Les objectifs de cette etude sont de definir les caracteristiques morphologiques et metaboliques des embryons bovins developpes in vitro, et une methode de cryoconservation adaptee a leurs proprietes membranaires specifiques. Nous avons defini une methode de reference pour la production des embryons sur cellules vero. Le nombre de noyaux des blastocystes co-cultives sur des cellules vero n'est pas different de ceux collectes in vivo. Les etudes du metabolisme du glucose, du fructose, de la methionine et de la glycine n'ont pas etabli de correlation entre l'incorporation de ces metabolites et l'appreciation morphologique des embryons. Les taux de gestation a 3 mois sont de 51,8% apres transplantation d'un blastocyste. Pour la conservation des embryons, nous avons defini dans un premier temps une methode d'equilibration et de dilution du cryoprotecteur en 2 etapes. La presence de serum et de sucrose limitent les variations de volume subies par les cellules au cours des etapes de deshydratation et de rehydratation. Les taux de gestation apres transplantation d'un embryon decongele sont de 29,8% a 35 jours et de 17% a 3 mois. L'addition de lecithine, molecule abaissant la temperature de changement de phase des lipides, dans le milieu de congelation ameliore les taux de survie in vitro des embryons decongeles. L'effet positif de la lecithine observe in vitro n'est pas traduit in vivo apres transplantation. Les taux de gestation sont de 10,7% a 35 jours et 7,1% a 3 mois. Dans un second temps, nous avons modifie les proprietes osmotiques des membranes avant la congelation. Nous avons suppose que la modification du contenu en lipides des embryons serait associee a une diminution de leur cryosensibilite. Apres la fecondation, les zygotes sont partiellement delipides, cultives jusqu'au stade blastocyste puis congeles. Apres transfert, les taux de gestation ne sont pas differents de ceux obtenus avec des embryons non delipides. La production de radicaux libres oxygenes lors des manipulations in vitro est a l'origine de modification de la fluidite des membranes. L'addition d'un antioxydant identifie in vivo : l'hypotaurine pendant la culture ameliore le nombre de blastocystes developpes mais ne modifie pas leur cryosensibilite.


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Informations

  • Détails : 197 p.
  • Annexes : 247 ref.

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  • Bibliothèque : Université Pierre et Marie Curie. Bibliothèque Universitaire Pierre et Marie Curie. Section Biologie-Chimie-Physique Recherche.
  • Disponible pour le PEB
  • Bibliothèque : Centre Technique du Livre de l'Enseignement supérieur (Marne-la-Vallée, Seine-et-Marne).
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : PMC RT P6 1998
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