Mise en place de cultures primaires d'hepatocytes bovins pour l'etude in vitro du metabolisme de xenobiotiques activateurs de croissance

par FRANCOIS BOERLEN

Thèse de doctorat en Sciences biologiques et fondamentales appliquées. Psychologie

Sous la direction de François André.

Soutenue en 1998

à Nantes .

    mots clés mots clés


  • Résumé

    Un nouveau protocole a ete adopte pour isoler en routine des hepatocytes de veaux de 4 mois. Un morceau de l'extremite du lobe gauche du foie est perfuse a l'aide d'un tampon hepes seul, puis supplemente avec 0,03% de collagenase. Les hepatocytes viables recuperes apres la digestion enzymatique sont purifies par centrifugation dans une solution de percoll. Au terme de 9 experimentations, nous avons obtenu chaque fois en moyenne 3 10#8 hepatocytes viables, avec une viabilite moyenne de 92%. Les hepatocytes de veau sont cultives sans ajout de matrice extracellulaire, dans du milieu e de williams exempt de serum de veau ftal. Apres plusieurs colorations histologiques, les tapis cellulaires presentent une morphologie stable pendant 3 semaines. Cette stabilite est verifiee au cours des 6 premiers jours de culture par le dosage de la concentration en atp, la fuite transmembranaire de lactate deshydrogenase, la teneur en cytochrome p450 total, et le profil metabolique de la testosterone. De plus, les hepatocytes de veau sont aptes a transformer la 4-chlorotestosterone par des voies identiques a celles decrites in vivo : les differences sont qualitativement mineures mais quantitativement importantes. Enfin, la spectrometrie de masse haute resolution a permis la detection et l'identification de plusieurs metabolites de phase i d'agonistes beta-adrenergiques. Ils correspondent essentiellement aux produits d'une desamination oxydative pour le clenbuterol, et de modifications du cycle pour le salbutamol.


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Informations

  • Détails : 263 P.
  • Annexes : 800 REF.

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  • Bibliothèque : Université de Nantes. Service commun de la documentation. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : 98 NANT 2111
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