Développement de vecteurs d'expresssion stable dérivés du densovirus JcDNV : application à l'expression constitutive de protéines hétérologues en lignées cellulaires de lépidoptères et comme marqueur au cours du développement chez la drosophile

par Hervé Bossin

Thèse de doctorat en Biologie cellulaire

Sous la direction de Max Bergoin.

Soutenue en 1998

à Montpellier 2 .


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  • Résumé

    Une serie de vecteurs derives du genome du densovirus jcdnv exprimant le gene gfp (green fluorescent protein) sous controle du promoteur viral p9 ont ete construits. La transfection de la lignee cellulaire sf9 de lepidoptere par ces construits conduit a l'expression stable de la proteine et a l'obtention de clones cellulaires en dehors de toute pression de selection. L'analyse du statut de l'adn viral recombinant dans ces clones montre qu'il y a integration dans l'adn cellulaire, via les repetitions terminales inversees, si les fonctions non structurales virales sont presentes, et maintien sous forme episomale si ces fonctions sont deletees. Par ailleurs, les potentialites d'expression stable en cellules spc-sl-52 d'une proteine d'interet, l'erythropoiteine humaine (epo), ont ete confirmees en construisant un recombinant du jcdnv exprimant le gene sous controle du promoteur de l'actine cytoplasmique a3 de bombyx mori. Des clones cellulaires exprimant l'epo a des taux significatifs (de 20 a 95 ui/ml de surnageant de culture) ont ete isoles et la stabilite d'expression demontree pendant plus de six mois. Enfin, la microinjection dans des oeufs de drosophiles, des construits jcdnv exprimant le gene lacz ou gfp, a conduit a l'expression de ces proteines dans les embryons, les larves et jusqu'au stade adulte, demontrant ainsi les potentialites de ces vecteurs pour la transformation genetique des insectes.

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Informations

  • Détails : 240p
  • Annexes : Bibliogr.: p. 213-240

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  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS 98.MON-207
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