Caractérisation moléculaire de la sarcosine déshydrogénase du rat et étude de l'activité génératrice de miniglucagon de la convertase PACE4 humaine

par François Bergeron

Thèse de doctorat en Biologie. Santé

Sous la direction de Dominique Bataille.

Soutenue en 1998

à Montpellier 2 .


  • Résumé

    Le glucagon, hormone polypeptidique de 29 acides amines, est rapidement clive, lorsqu'il est incube a la surface de cellules hepatiques en culture, en c-terminal du doublet de residus arginine situe en position 17 et 18. Cette maturation proteolytique mene a la formation du glucagon 19-29, ou miniglucagon, molecule qui demontre une activite biologique completement differente de celle du glucagon. Plusieurs efforts ont ete menes dans le but d'isoler, a partir d'extraits de membranes hepatiques, l'activite proteolytique responsable de cette conversion. L'etude de cette activite purifiee permit d'identifier les principales caracteristiques enzymatiques de cette protease et d'obtenir une sequence peptidique partielle. Les resultats presentes dans ce memoire demontrent que cette sequence peptidique partielle provenait en fait d'une proteine mitochondriale, la sarcosine deshydrogenase, presente a l'etat de contaminant dans la preparation enzymatique purifiee. L'adnc de cette enzyme a ete clone et la proteine correspondante caracterisee biochimiquement. Une etude de la localisation tissulaire de l'enzyme a ete realisee, demontrant une expression forte au niveau du foie, ainsi qu'un niveau d'expression considerable dans d'autre tissus tels que le poumon, le pancreas, le rein, le thymus et l'oviducte. Afin d'identifier l'enzyme responsable de la generation du miniglucagon, trois proteases hepatiques de la famille des convertases apparentees a la subtilisine ont ete exprimees sous forme de proteine recombinantes et testees in vitro pour leur capacite a cliver le doublet arginine central du glucagon. Seul pace4, et non la furine ou pc7, a demontre une capacite a generer le miniglucagon, et ce de maniere tres efficace. Le profil enzymatique du clivage du glucagon par pace4 correspond bien aux caracteristiques de la protease partiellement purifiee de membranes de foie, notamment au niveau de l'inhibition par des doses nanomolaires d'insuline. Cependant, ces etudes ont egalement demontre la presence dans les extraits membranaires hepatiques d'au moins une autre protease susceptible de generer le miniglucagon, et dont l'activite est insensible a l'insuline.

  • Titre traduit

    Molecular characterization of rat sarcosine dehydrogenase and study of the miniglucagon-generating activity of the human pace4 convertase


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  • Détails : 114 f
  • Annexes : Bibliogr. f. 88-113

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