Synthèse supportée de prodrogues d'oligonucléotides : développements méthodologiques, marquage avec de la fluorescéine et étude préliminaire de leur internalisation cellulaire

par Christelle Dell'Aquila

Thèse de doctorat en Chimie organique, minérale, industrielle

Sous la direction de Bernard Rayner.

Soutenue en 1998

à Montpellier 2 .


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  • Résumé

    Dans le but d'ameliorer la penetration cellulaire des oligonucleotides, une approche originale, appelee pro-drogue, a ete imaginee. Elle consiste a masquer partiellement ou totalement les charges negatives des oligonucleotides par des groupements enzymolabiles susceptibles de s'eliminer apres internalisation du pro-oligonucleotide par des esterases cellulaires. Cette these porte sur deux aspects essentiels du concept. Les groupements masquants et les liens internucleosidiques phosphotriesters etant sensibles aux bases et aux nucleophiles, nous avons concu un nouveau support photolabile, derive du maillon 1-(2-nitrophenyl)-1,3-propanediol, permettant la synthese des pro-drogues. D'autre part, et dans le but d'identifier les differents facteurs (nombre de groupements masquants necessaires, distribution des groupements dans le pro-oligonucleotide, ) susceptibles d'influencer l'internalisation cellulaire des pro-oligonucleotides, nous avons synthetise, selon une methode originale, une gamme de pro-oligonucleotides mixtes comportant un nombre variable de charges negatives permettant leur solubilite aqueuse et nous avons analyse par microscopie de fluorescence leur capacite a penetrer les membranes cellulaires. L'introduction de liens internucleosidiques phosphodiesters charges au sein du pro-oligonucleotide a ete realisee par l'intermediaire de liens internucleosidiques temporairement proteges par un groupement o-methylbenzyle. Ce groupement a pu etre efficacement enleve par une solution d'iode aqueuse lors de l'etape d'oxydation realisee durant l'assemblage de l'oligonucleotide a l'aide d'un synthetiseur automatique. Les differents pro-oligonucleotides ont ete marques par une sonde fluorescente derive de la 5(6)-carboxyfluoresceine. Les reactifs commerciaux permettant l'introduction de cette sonde etant incompatibles avec le maintien des groupements enzymolabiles, nous avons synthetise un reactif approprie.

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Informations

  • Détails : 192 p
  • Annexes : Bibliogr.: p. 157-177

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  • Bibliothèque : Bibliothèque interuniversitaire. Section Sciences.
  • Disponible pour le PEB
  • Cote : TS 98.MON-151
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